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【關(guān)鍵詞】噬菌體生物擴增法;聚合酶鏈反應技術(shù);結(jié)核;分枝桿菌
【中圖分類號】R378.91+1【文獻標識碼】A【文章編號】1007-8517(2010)16-159-2
結(jié)核分枝桿菌感染人體而引發(fā)的結(jié)核病是全球性的嚴重危害人類的傳染性疾病之一。我國作為發(fā)展中國家,結(jié)核病的控制更是任重道遠。在結(jié)核病控制中,尋求經(jīng)濟,快速,敏感性和特異性較高的結(jié)核菌檢測方法,為結(jié)核的早期診斷提供依據(jù)是眾多臨床醫(yī)師所希望。目前痰熒光涂片靈敏度較差,并受痰樣本數(shù)和病情的影響,一般認為活動性肺結(jié)核涂陽率約40-50%[1];羅氏培養(yǎng)法陽性率較高約50-80%[1],但需要平均時間約4-8周。本研究通過PhaB法、熒光涂片法、PCR檢測法、羅氏培養(yǎng)法檢測肺泡灌洗液中結(jié)核分枝桿菌,通過對照評價PhaB法在肺結(jié)核診斷中的使用價值及優(yōu)缺點。
1資料與方法
1.1臨床資料選取2008-2010年廣州市胸科醫(yī)院疑診初治肺結(jié)核住院患者80例,其中男性35例,女性25例,年齡19～65歲,平均年齡38.5±7.5歲。入選條件:疑診為初治肺結(jié)核并支氣管結(jié)核,未開始抗結(jié)核治療;三個月內(nèi)未接受喹諾酮類和氨基糖甙類抗生素治療。
1.2方法
1.2.1PhaB法結(jié)核分枝桿菌噬菌體生物擴增試劑盒(FAST plaue TB)由英國BDTEC公司生產(chǎn),由上海市金浩科技發(fā)展有限公司提供。
1.2.2支氣管沖洗液標本收集按支氣管鏡檢查常規(guī)進行術(shù)前準備和麻醉,通過胸部CT或胸片初步確定重點檢查部位。氣管鏡經(jīng)鼻腔進入,通過聲門逐步檢查氣管,支氣管。對鏡下可見病變部位,可先后進行支氣管粘膜活檢和支氣管刷檢,隨后進行支氣管沖洗,將生理鹽水5～10毫升注入相應的肺葉和肺段病變部位進行沖洗,用吸引器將沖洗液收集入標本瓶中送檢,共2-3次。對鏡下病變部位不明顯處,將纖支鏡插入病灶最多部位所在的支氣管開口按上述方法進行刷檢、沖洗,留取標本。
1.2.3噬菌體生物擴增法按試劑盒(FASTPlaqueTBTM)說明書配制所需試劑,包括培養(yǎng)基-生物添加劑、瓊脂、噬菌體和敏感細胞等,全部操作在無菌操作臺進行。肺泡灌洗液洗標本的處理:取灌洗液標本5ml,加入1倍體積的4%NAOH溶液混勻常溫靜置15min去污染。加入磷酸緩沖液(PH6.8)離心20min,棄去上清液。重懸沉淀物,4000g離心15min,棄去上清液,重懸沉淀物,無菌條件下吸取1ml重懸液加入孵育管中,37℃孵育24小時。檢測:每次取1ml處理后的樣品加入各反應管中,陰性對照不加標本,陽性對照加入1:1000稀釋度的敏感細胞液。加入100ul噬菌體溶液在37℃條件下培育1h。在每個反應管中加入100ul強效殺毒劑溶液,上下充分混勻,室溫放置5min后加入5ml培養(yǎng)基-生長添加劑和1ml敏感細胞液。將反應管中所有反應混合物倒入培養(yǎng)皿中,加入5ml融化的瓊脂,快速混勻靜置成型。37℃溫育18-24小時后觀察結(jié)果。結(jié)果判斷:噬菌斑數(shù)19個陰性,20個位陽性。
1.2.4其他檢測方法熒光涂片法:用金胺“O”熒光染色涂片法,熒光顯微鏡檢每50個視野≥10-99條抗酸桿菌為陽性;結(jié)核菌培養(yǎng):用BacT/Alert3D全自動分枝桿菌快速培養(yǎng)儀按照儀器使用說明書進行臨床標本的分離培養(yǎng);熒光定量聚合酶鏈反應技術(shù)(PCR檢測):檢測沖洗液結(jié)核分枝桿菌DN段,TB-DNA基因拷貝數(shù)量>1×103拷貝/mL陽性
1.2.5統(tǒng)計學處理采用SPSS統(tǒng)計軟件進行分析,用X2檢驗比較不同檢測方法的陽性率,P
2結(jié)果
初步診斷為肺結(jié)核合并支氣管內(nèi)膜結(jié)核的,未予抗癆治療的纖支鏡肺泡灌洗液標本80例。使用PhaB法、熒光涂片法、PCR檢測法、羅氏培養(yǎng)法四種檢測方法,PhaB法陽性率58.8%,熒光涂片法陽性率為47.5%,PCR檢測法陽性率65%,快速培養(yǎng)法陽性率76.3%。其中,PhaB法檢測陽性率明顯高于熒光涂片法,檢驗差異有顯著性意義(X2=4.27,P0.05),提示兩者陽性檢出率類似;PhaB法與羅氏培養(yǎng)法比較檢驗有顯著性差異(X2=12.07,P0.05)。
表一 80例初步診斷肺結(jié)核肺泡灌洗液使用PhaB法、熒光涂片法、PCR檢測法、羅氏培養(yǎng)法進行檢測陽性結(jié)果
方法 標本例數(shù) 陽性例數(shù) 陽性檢出率(%)
①PhaB法 80 47 58.8
②熒光涂片法 80 38 47.5
③PCR檢測 80 52 65
①③兩種方法聯(lián)合 80 58 72.5
④羅氏培養(yǎng)法 80 61 76.3
PhaB法檢出的47份陽性標本中,熒光涂片法檢出35例陽性;PhaB法檢出的33份陰性標本中,熒光涂片法檢出30例陰性。PCR法檢測的52份陽性標本中,PhaB法檢出41份,檢出率78.8%;羅氏培養(yǎng)法陽性的61例標本中,PhaB法檢測出44份,檢出率72.1%。
表二 80例初步診斷肺結(jié)核肺泡灌洗液使用PhaB法、熒光涂片法、PCR檢測法、羅氏培養(yǎng)法進行檢測結(jié)果比較
熒光涂片法 PCR檢測法 羅氏培養(yǎng)法
陽性 陰性 陽性 陰性 陽性 陰性
PhaB法 陽性(n=47) 35 12 45 2 47 0
陰性(n=33) 3 30 7 26 14 19
合計 38 42 52 28 61 19
3討論
1997年wilson等[2]人發(fā)現(xiàn)眾多的噬菌體中有一種分枝桿菌噬菌體能感染結(jié)核分枝桿菌和少數(shù)幾種非結(jié)核分枝桿菌。在經(jīng)過處理的標本中加入結(jié)核分枝桿菌噬菌體,使噬菌體和分枝桿菌結(jié)合,隨后加入殺毒劑滅活未感染分枝桿菌的噬菌體。噬菌體在受感染的分枝桿菌內(nèi),利用其代謝酶系進行大量繁殖。當分枝桿菌破裂,大量的子代噬菌體被釋放,感染加入的敏感指示細菌,在培養(yǎng)基上經(jīng)培養(yǎng)形成噬菌體空斑。當空斑數(shù)量>20個為陽性,否則為陰性。陽性的標本間接提示原標本有結(jié)核分枝桿菌或少數(shù)的幾種非結(jié)核分枝桿菌。這構(gòu)成了噬菌體法檢測分枝桿菌的理論基礎(chǔ)[3]。據(jù)國外資料報道,2002年南非Albert[4]等人對疑似肺結(jié)核患者,以羅氏培養(yǎng)法為金標準,噬菌體法對痰標本檢測的敏感性73%,特異性為99%;巴基斯坦Muzaffar[5]等人用類似方法測得噬菌體法的敏感性82%,特異性98%;國內(nèi)于秀麗[6]等人用BACTEC MGIT980快速培養(yǎng)法作為金標準,測得噬菌體法檢測痰中結(jié)核分枝桿菌的敏感性為86.4%,特異性83.9%。均顯示噬菌體法對痰中分枝桿菌檢測有較高的敏感性和特異性。
本研究用噬菌體生物擴增法、熒光涂片法、聚合酶鏈反應技術(shù)、羅氏培養(yǎng)法共4種方法同時檢測不同的纖支鏡肺泡灌洗液標本80份。PhaB法、熒光涂片法、PCR檢測法、羅氏培養(yǎng)法陽性檢出率分別為58.8%,47.5%,65%,76.3%。PhaB法和熒光涂片法陽性率比較,差異有顯著性意義(X2=4.27,P0.05);噬菌體生物擴增法以羅氏培養(yǎng)法為金標準,結(jié)果提示其敏感性77%,特異性100%,陽性預測值100%,陰性預測值57.6%。和國外以痰標本PhaB法檢測報道結(jié)果相似[4]。聯(lián)合PhaB法和熒光涂片法檢測敏感性為81.2%,特異性為100%,陽性預測值100%,陰性預測值57.6%;聯(lián)合PhaB法和PCR檢測法檢測敏感性為88.5%,特異性為89.5%,陽性預測值96.3%,陰性預測值89.5%。提示聯(lián)合PhaB法和PCR檢測法,能快速診斷肺結(jié)核,有較高的敏感性和特異性,在臨床中可能有較大的實用價值。這有待于更大的標本量進一步驗證。
結(jié)核分枝桿菌細菌學檢測是診斷結(jié)核的金標準之一,但患者排菌情況受結(jié)核病發(fā)現(xiàn)時期較大影響,對早期以滲出、增殖為主的病理改變,排菌量較小;而發(fā)生壞死,空洞形成的患者相對排菌量較大。同時病灶相連的支氣管引流是否通暢也影響遠端氣管內(nèi)分泌物的排出,影響到痰結(jié)核菌的檢查。本組病例肺泡灌洗液標本PhaB法陽性檢測率較高,除了與病例的選擇有關(guān),考慮原因:支氣管鏡檢查對支氣管、肺泡的機械性刺激,活檢鉗和毛刷損傷支氣管壁和病灶邊緣,同時在在纖支鏡活檢和刷檢后灌洗可起到疏通支氣管,促進遠端分泌物的排出。用生理鹽水在病變部位注入遠端氣道和肺實質(zhì),接觸病灶范圍較廣,負壓吸引收集沖洗液較多,細菌量較大,深部的結(jié)核菌可能被收集到?jīng)_洗液中。肺泡灌洗液對支氣管有刺激作用,可以誘發(fā)部分患者咳嗽,有利于深部結(jié)核菌的排出,獲得結(jié)核菌的機會增多[7]。另外,PhaB法是通過噬菌體感染結(jié)核分枝桿菌,而結(jié)核分枝桿菌受一些理化因素作用,表面受體發(fā)生細微變化可能導致不能被噬菌體感染[8]。相對痰標本,肺泡灌洗液標本受理化因素影響較小。
總結(jié)噬菌體生物擴增法對肺泡灌洗液標本分枝桿菌檢測的臨床應用。PhaB法操作簡便,獲取結(jié)果快速(2天),相對熒光涂片法有較高的敏感性和特異性。對PhaB法分枝桿菌檢測高特異性,臨床可以用于結(jié)核桿菌和非結(jié)核分枝桿菌的菌種鑒定[9]。針對噬菌體必須感染活的結(jié)核菌特性,臨床中還可以對標本加入不同的結(jié)核藥,對照不加藥標本,篩查結(jié)核菌株對不同結(jié)核藥的耐藥性[2]。
參考文獻
[1] 馬嶼,朱莉貞,潘毓萱.結(jié)核病[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2006:103-108.
[2] WLSON SM,ALSUWADIZ,MCNERNEYR,et al Evaluation of an new rapid bacteriophage-base medthod for the drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis[J].Natmed,1997,3:465-469.
[3] 彭麗,羅永艾,王國治.噬菌體生物擴增法快速檢測結(jié)核分枝桿菌標準化研究[J].中華結(jié)核和呼吸雜志,2004,27(12):806-810.
[4] ALber H,Heydenrych A,Brookes R,et al Performance of a rapid phage-based test,FAST Plaque TBTM,to diagnose pulmonary tuberculosis from sputum specimens in South Afica[J].Int J Tuberc Lung Dis,2002,6:529-537.
[5] Muzaffar R,Batool S,Aziz F,et al Evalution of the FAST Plaque TB assay for direction of mycobacterium tuberculosis in sputum specimens[J].Int J Tuberc Lung Dis,2002,6:635-640.
[6] 于秀麗,王秋月,李艷玲.噬菌體生物擴增法快速檢測痰結(jié)核分枝桿菌的臨床研究[J].中國實用內(nèi)科雜志,2007,27(11):1697-1699.
[7] 常占平,彭勛,王洪芬,等.纖維支氣管鏡檢查對無痰或痰菌陰性不典型肺結(jié)核的診斷價值[J].中華臨床醫(yī)師雜志,2008,2(8):922-926.
【關(guān)鍵詞】淋病奈瑟菌；沙眼衣原體；解脲支原體；檢測分析
文章編號：1009-5519（2008）13-1962-02 中圖分類號：R446 文獻標識碼：A
我們于2000~2002年對自述泌尿生殖道感染的門診患者開展了淋病奈瑟菌（NG）、沙眼衣原體（CT）及解脲支原體（UU）的檢查，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。
1 材料與方法
1.1 標本來源:按常規(guī)方法女性取宮頸分泌物，男性取尿道分泌物、前列腺粹等標本。近3年來在我院門診就診患者共獲取泌尿生殖道標本5 008份，其中男性標本2 759份，女性標本2 249份。
1.2 實驗材料
1.2.1 試劑：TM淋病奈瑟菌分離培養(yǎng)基（浙江軍區(qū)衛(wèi)生防疫站）；解脲支原體液體培養(yǎng)基（廣州萬孚生物研究所）；單克隆抗體免疫熒光法沙眼衣原體特異性診斷試劑盒（軍事醫(yī)學科學院病毒所）；革蘭氏染液（自配）。
1.2.2 器材：消毒男性拭子及女性拭子、載玻片、甲醇、染色濕盒。
1.2.3 儀器： 孵育箱、熒光顯微鏡、光學顯微鏡，旋轉(zhuǎn)式振蕩器。
1.3 方法：接種：將消毒棉拭子所有的標本按淋病奈瑟菌，沙眼衣原體及解脲支原體的順序依次接種。（1）在TM培養(yǎng)基上分區(qū)劃線；（2）再將標本涂在無菌的載玻片上，以甲醇固定10 min，取出后于空氣中充分揮發(fā)；（3）最后將取有標本的棉拭子放于解脲支原體液體培養(yǎng)基中輕輕攪動后取出。
1.3.1 分離培養(yǎng)和鑒定：（1）接種后將TM培養(yǎng)基置于37 ℃，5%~10% CO2環(huán)境下孵育，18~24 h后，可形成直徑約0.5~1 mm、灰白色、光滑、半透明、呈露滴狀的圓形凸起菌落?？梢删湎扔醚趸福?）試驗證實，然后作生化和免疫鑒定。（2）將固定在玻上的標本加抗衣原體熒光抗體25 uI，放入濕盒中，密蓋，置37 ℃溫箱孵育30 min，用含吐溫80的磷酸鹽緩沖液入洗槽中，放旋轉(zhuǎn)式振蕩器振蕩洗滌5 min，共3次，吹干，滴緩沖甘油作鏡油，于熒光顯微鏡下檢查。查見亮綠色，具有典型大小，邊界清晰的圓形顆粒、柱狀細胞內(nèi)可見亮綠色包涵體，可報告“衣原體熒光抗體染色陽性”。（3）解脲支原體液體培養(yǎng)基置于35 ℃孵育24 h，觀察液體呈紅色清亮即為陽性；若不變色，再放24 h觀察，紅色、清亮為陽性，不變色為陰性。（4）將已固定的細菌涂片，按常規(guī)革氏染色后鏡檢。若男性急性尿道炎患者的膿性分泌物中呈現(xiàn)中性粒細胞內(nèi)外有G-雙球菌，可報告為“查見G-雙球菌（細胞內(nèi)外），”具有診斷價值。
2 結(jié)果
2.1 近3年來共計檢測標本5 008份，男性2 759份，3種病原體陽性共633份，檢出陽性率22.9%；女性2 249份，3種病原體陽性共433份，檢出陽性率19.3%。
2.2 1 006份陽性標本中，患者年齡分布：40歲104例占9.8%。3種病原體在不同性別人群中的檢出結(jié)果見表1。
2.3 在檢出的1 006例中NG陽性218例占20.5%，CT陽性196例占18.4%，UU陽性652例占61.1%。
2.4 各種病原體混合感染情況：NG與CT混合感染為18例，陽性感染率1.7%，其中男8例，女10例。NG與UU混合感染37例，陽性感染率3.5%，其中男13例，女24例。CT與UU混合感染為30例，陽性2.8%，其中男20例、女10例。NG、UU與CT混合感染為1例。
3 討論
3.1 隨著國內(nèi)外交往日益頻繁，性意識和的改變，性傳播疾病已成為常見疾病，因此，開展性病防治、性病監(jiān)測及開展新的檢測技術(shù)早期診斷，提高檢出率是衛(wèi)生工作者的重點。
3.2 由于男、女生理上的差異，淋病在男性的臨床特征明顯，在門診直接用膿液涂片革蘭氏染色，陽性檢出率可達90%以上，無需再做細菌培養(yǎng)。而女性淋病患者，細菌培養(yǎng)有十分重要的意義。
3.3 本文對3年來我院性病門診疑為泌尿生殖道感染患者5 008例。分別或同時進行NG、CT、UU的檢測，病原檢測陽性者1066例，占被檢人數(shù)的21.3%，陽性率由高到低為UU（13%）>NG(4.4%)>CT(3.9%)。UU與NG、CT有顯著性差異（P
3.4 三種病原體的檢出中，陽性檢出的最小年齡為4歲，最大為70歲，青壯年是陽性檢出的主體；大多集中在20~40歲，占總檢出標本的81.1%。應加強這一年齡段的健康教育，以提高人們的文化素質(zhì)、法制觀念、性道德觀念以及健康知識和自我保護意識[2]。
3.5 從表1可見，淋病奈瑟菌、沙眼衣原體及解脲支原體混合感染普遍，所以對尿道炎患者應同時進行三項聯(lián)檢測，防止漏診或誤診現(xiàn)象出現(xiàn)。
參考文獻：
[1] 于中麗，黨 肯.非淋球菌性病尿道炎病原體構(gòu)成分析[J].陜西醫(yī)學檢驗，2000，15（1）：19.
關(guān)鍵詞：布魯氏桿菌；免疫磁珠；優(yōu)化選擇性培養(yǎng)基
中圖分類號：S85 文獻標識碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20160932027
布魯氏桿菌，是馬耳他熱和波浪熱的病原菌，每年患者人數(shù)不斷增加，成為流行病學中高度關(guān)注的致病源。布魯氏桿菌主要通過畜產(chǎn)品和皮毛加工及養(yǎng)殖接觸傳染，寄生于細胞內(nèi)，引起機體免疫力下降，可以導致患者喪失勞作能力和流產(chǎn)等，是食源性疾病中增長較快的一類致病源[1]。目前活菌培養(yǎng)依然是最好的評價布魯氏桿菌感染的方法，只要在標本中檢出，就可以確定食品的安全性并對布魯氏桿菌污染實現(xiàn)追蹤溯源。
1 材料與方法
1.1 Dynabeads M-280磁珠 （日本DYNAL社產(chǎn)）
EDC solution 液；NHS solution液；BST溶液；MEST洗液；羊布魯氏桿菌；羊布魯氏血清；羊抗兔Ig；馬血清；赤蘚醇；白細胞介素2；胰蛋白；葡萄糖；煙酸；生物素；維生素B1；D-環(huán)絲氨酸 ；甲基乙醚；多黏菌素B；桿菌肽；放線菌酮；制霉菌素；瓊脂粉。
1.2 磁珠的偶聯(lián)
將2mg 磁珠加入2mL Eppendorf管中，管中加入500uL MEST對磁粒子進行洗滌3次。加入EDC與NHS各2.5mg，調(diào)整反應體積為500uL，混勻后37℃恒溫活化0.5h，用MEST洗滌除去未反應的活化劑，換管洗滌2次。再用BST液洗滌2次，分散到BST中。加入抗血清300 uL，調(diào)整反應體積為500uL，4℃偶聯(lián)20h。用BST液洗滌4次，500μL保存液重懸偶聯(lián)好的抗體磁珠。
Dynabeads M-280 磁珠時用下列方法處理：取羊抗兔 Ig （G）0.5 mL，加1 mL PBS-Tween溶液混勻。離心，棄去上清液。再加1 mL PBS-Tween 液使磁珠重新分散懸浮其中。加羊布魯氏桿菌免疫血清1mL，4℃垂直于水平面、旋轉(zhuǎn)振蕩18h。上磁，棄液體。消磁，用1 mL洗液清洗，重復清洗5次。洗凈后免疫磁珠放4℃冰箱備用。
1.3 選擇性培養(yǎng)基配置
葡萄糖0.1g；赤蘚醇 0.2g；胰蛋白?12g；氯化鈉3g；馬血清23mL煙酸 0.5 mg；生物素 0.2 mg；維生素B10.5 mg；D-環(huán)絲氨酸 321.5mg；甲基乙醚1：20000；多黏菌素B 1：4000；桿菌肽 1：25000；放線菌酮1：100000；制霉菌素10000單位；硫酸鋅 2μg；氯化銅1μg；硫酸鈷 2μg；三氯化鐵27μg；三氯化鋁10μg；用蒸餾水定容至1L，pH =6.8。將上述培養(yǎng)基取200 mL添加1.5%瓊脂粉，制備成選擇性培養(yǎng)基，其余分裝成100mL/瓶選擇性增菌液。上述培養(yǎng)基在115℃， 20min條件下滅菌備用。
1.4 樣品測試
將布魯氏桿菌肉湯增菌后，用血球計數(shù)板法稀釋到每毫升含菌1×103CFU/mL，然后取0.1 mL分別添加到100g牛奶、100g羊腿肌肉、100g水樣品中，混勻成測試樣。
將上述樣品分別稱取25g于100 mL增菌液中，37℃、5%CO2條件下進行增菌培養(yǎng)24～48h。
1.5 免疫磁珠富集
吸取1mL增菌液，放入含有5mg免疫磁珠管內(nèi)，室溫垂直旋轉(zhuǎn)振蕩20min。上磁架，固定磁珠，棄樣液。加1mL 洗液復混后同前操作。清洗4～5次后，加100uL PBS-Tween液使免疫磁珠和目標混勻備用。
1.6 選擇性分離培養(yǎng)和計數(shù)
將免疫磁珠混勻后移入標準一次性平板內(nèi)，倒入45℃左右選擇性培養(yǎng)基，搖勻。或在預先鋪好的選擇性平板上采用涂布法涂布。將接好種選擇性平板在37℃，5%CO2條件下培養(yǎng)24～48h，計數(shù)。
1.7 培養(yǎng)結(jié)果和比較
挑取10株平板菌落，分別接種在生化管培養(yǎng)，符合以下生化反應的為羊布魯氏桿菌：革蘭氏染色-，觸酶+，氧化酶-，葡萄糖-，半乳糖-，阿拉伯糖+，硝酸鹽-，尿酶-，精氨酸-，H2S-，硫堇+，明膠-，吲哚-，MR-，VP-，枸櫞酸鹽-，甘露醇-。
計算公式：布魯氏桿菌=選擇平板總菌落數(shù)×（陽性株÷10），結(jié)果見表1。
2 討論
布魯氏桿菌的檢測逐步被分子學檢測所代替，但是不可否認分子學也存在著弊端，樣品中即便存在布魯氏桿菌的核酸但未必說明樣品具有生物可傳染性，經(jīng)典的活菌培養(yǎng)法在確認布魯氏桿菌的生物安全性上具有更可靠性。
相比較，采用免疫磁珠聯(lián)合選擇性培養(yǎng)基法檢測布魯氏桿菌可以極大提高布魯氏桿菌的檢出限，這主要得益于優(yōu)化的培養(yǎng)基豐富了布魯氏桿菌必須的生長因子及免疫磁珠的富集優(yōu)勢，使得活菌培養(yǎng)法豐富了布魯氏桿菌的微生物學研究與檢驗方面實驗需要。
參考文獻
重大主題宣傳是新聞媒體促進科學發(fā)展、共創(chuàng)社會和諧的重要使命，這也是新聞媒體作為黨和政府的喉舌，承擔主流輿論引導的重大社會責任。
網(wǎng)絡(luò)新聞宣傳在報道重大主題方面尤顯獨特的方式和優(yōu)勢。網(wǎng)絡(luò)新聞本質(zhì)上具有同步性、受眾參與性，形式上具有互動性、海量性、多媒體性?；ヂ?lián)網(wǎng)Web2.0超越時空的開放性，讓人們潛在的參與意識有了爆發(fā)的平臺：從手機短信、電子郵件、留言板，到BBS、QQ、MSN、博客、播客，網(wǎng)民們不僅可以互相交流，而且也可以通過網(wǎng)絡(luò)傳播以自己的思想和語言影響社會大眾。
如何讓重大主題宣傳產(chǎn)生最大的社會作用？一個重要的課題就是要從受眾接受心理出發(fā)，研究重大主題宣傳報道如何讓受眾入耳、入腦、入心。讓受眾從被動接受轉(zhuǎn)為主動參與，參加到重大主題宣傳報道中來，在參與中接受教益。
受眾參與的時代特征：
受眾的參與權(quán)、表達權(quán)、傳播權(quán)，是和諧社會和諧文化的重要內(nèi)容
Web2.0時代，新聞采播不再是媒體的專利，任何接觸新聞事件的人員都可能以自己的視角來觀察和報道新聞事件，網(wǎng)絡(luò)媒體逐漸成為個性化傳播平臺。博客、播客、個人門戶、手機報紙、網(wǎng)絡(luò)互動報刊、互動搜索等等內(nèi)容更豐富，互動性、個性化更強的Web2.0 模式更是體現(xiàn)了互聯(lián)網(wǎng)這種新的發(fā)展趨勢。
受眾主動參與重大主題宣傳報道是時代的要求。構(gòu)建社會主義和諧社會，需要全社會的共同參與。和諧文化建設(shè)賦予了媒體與受眾關(guān)系的新的含義，和諧文化提倡共建共享，網(wǎng)絡(luò)文化建設(shè)尋求平等參與。受眾是新聞傳播的積極參與者，尊重受眾參與傳播的權(quán)利并積極創(chuàng)造條件，是新聞傳播工作的應盡之責。在主題宣傳報道時通過受眾參與，來反映和諧社會建設(shè)中被改變的、將要改變的和期待改變的生活，最大程度地讓百姓感受到建設(shè)和諧社會中黨和政府的人文關(guān)懷。
相當長時期，我們很少將受眾作為傳播權(quán)利主體，媒體總是處于主動，受眾處于被動。隨著國家生活中民利的增加，受眾在新聞活動中的民主意識也不斷加強。要真正重視以受眾為中心，不但尊重受眾的知情權(quán)，同時發(fā)揮受眾的參與權(quán)、表達權(quán)、傳播權(quán)，這應當成為和諧新聞文化建設(shè)的一個重要內(nèi)容。
在全國“兩會”報道中，新華網(wǎng)連續(xù)幾年推出“向總理提問”的受眾參與主題。2007年央視《今日關(guān)注》“兩會”特別節(jié)目連續(xù)15天推出《我有問題問總理》的板塊?！皟蓵逼陂g，共征集到網(wǎng)友提問20多萬條，點擊率超過千萬?！拔矣袉栴}問總理”為何能夠牽動千萬網(wǎng)民心？隨著網(wǎng)絡(luò)時代的深入發(fā)展，越來越多的受眾開始借助互聯(lián)網(wǎng)工具平臺表達著自己對國家崛起的巨大熱情，網(wǎng)絡(luò)民意也逐漸體現(xiàn)出了它無可替代的優(yōu)越性和廣泛性。無論你是位居高位的官員，還是普通的國家公民，借助互聯(lián)網(wǎng)都可能有與總理“面對面”交流的機會，你的意見建議甚至會被總理采納。網(wǎng)絡(luò)以它獨特的優(yōu)勢，能夠跨越時空的界限匯集多方民意，能夠迅速拉近千家萬戶百姓的距離。
受眾參與的新聞性：
受眾參與孕育了“互動性新聞”，這是互聯(lián)網(wǎng)新的新聞表現(xiàn)形式
2006年美國《時代》周刊年度人物是“You”。全球10億網(wǎng)民手中的鼠標，讓《時代》周刊做出了明智選擇。關(guān)注“你”就是關(guān)注受眾。關(guān)注“你”的感受，吸引“你”的注意力，讓“你”參與到宣傳報道中來。
網(wǎng)絡(luò)媒體受眾參與孕育了一種新的新聞表現(xiàn)形式――互動性新聞。什么是互動性新聞？互動性新聞是建立在網(wǎng)絡(luò)媒體交互平臺上，經(jīng)過受眾參與互動而產(chǎn)生的具有新聞價值的事實。互動性新聞具有鮮明的個性特征：一是具有傳受雙方互動交流的特質(zhì)；二是具有第一時間、無限空間和廣泛參與性；三是具有現(xiàn)場（超）文本互動和二度傳播效能。
在互聯(lián)網(wǎng)這個最大、最具開放性、最富平等和活力的思想交流平臺上，受眾作為信息單向接受者的被動地位已經(jīng)改變，他們毫無拘束地發(fā)表自己的意見、要求和愿望，直接參與各種新聞信息和思想觀點的傳播。受眾的參與內(nèi)容成為主題報道的一個部分，是對報道主題的另一種深化和延伸。受眾互動和參與，摒棄了傳統(tǒng)媒體單純的宣傳、教育、告知的功能，最大限度地調(diào)動起普通受眾的參與熱情。受眾參與的雙重性，即心理上的間接參與和行為上的直接參與，又最大程度上刺激了受眾的積極性。讓讀者參與到重大主題報道中來形成互動，能提升重大主題報道的影響力并形成轟動效應。
中國寧波網(wǎng)圍繞紀念建軍80周年，精心策劃了“我是一個兵”八個一系列活動主題集約、形體發(fā)散、網(wǎng)民互動。充分發(fā)揮網(wǎng)絡(luò)媒體的及時性、互動性、表現(xiàn)多樣等優(yōu)勢，把主題宣傳與網(wǎng)民參與有機結(jié)合起來，有100多萬人次直接和間接地參與了主題活動，得到了當?shù)厥∈蓄I(lǐng)導部門的高度肯定。
原創(chuàng)征文，回味軍旅。在天一論壇、博客開設(shè)“我是一個兵”征文專區(qū)。受眾講述動人的軍旅故事，有退伍軍人、軍人家屬、普通百姓等，征文200余篇，評出優(yōu)秀征文近20篇。建軍感言，真情流露。在天一論壇和手機報紙中開設(shè)專欄，向全體網(wǎng)友征集“我對建軍節(jié)的一句話”。市民通過短信、電話、發(fā)帖、郵件等方式參與，共收集到300余條經(jīng)典感言。軍旅照片，精彩紛呈。舉辦“紅色記憶?我眼中的80年”網(wǎng)上原創(chuàng)圖片展，征集網(wǎng)友原創(chuàng)貼圖，同時制作了專題頁面供網(wǎng)友上傳圖片，共收到作品200多份。軍事電影，眾人評說。由網(wǎng)友推薦以軍事為體裁的優(yōu)秀電影共75部。最后由網(wǎng)友投票選出了“我最喜歡的軍事電影”。廣為熟悉的《小兵張嘎》、《上甘嶺》、《地雷戰(zhàn)》、《平原游擊隊》、《血戰(zhàn)臺兒莊》、《地道戰(zhàn)》、《閃閃的紅星》榜上有名。經(jīng)典軍歌，風采再現(xiàn)。在論壇和網(wǎng)上廣播中向廣大歌友征集“我最喜愛的一首軍歌”，共百名網(wǎng)友用自唱自錄，老歌新唱等形式翻唱了革命歌曲。調(diào)查互動，體現(xiàn)民心。以“我看軍旅生活”為主題，開展一次以軍營生活為背景的網(wǎng)絡(luò)調(diào)查，就網(wǎng)民關(guān)心的問題開設(shè)網(wǎng)上問卷，上萬人次參與。創(chuàng)作網(wǎng)刊，深化主題。制作了建軍八十周年“我是一個兵”主題網(wǎng)刊，集文字、圖片、音樂、視頻、互動為一體，刊登各項活動中的優(yōu)秀作品，回顧系列宣傳活動的效果。
受眾參與的互換性：
受眾參與改變傳媒與受眾關(guān)系，主題參與改變了傳媒價值取向
重大主題宣傳的受眾參與不僅是新聞“三貼近”的具體表現(xiàn)，也是新聞創(chuàng)新的一個原動力。加強主題宣傳的創(chuàng)新策劃，吸引受眾對新聞媒介的關(guān)注和對新聞事件、新聞報道全過程的參與是重大主題報道的一個重要內(nèi)容。受眾的參與需求改變了傳媒與受眾的關(guān)系，也改變著媒體的傳統(tǒng)價值取向。受眾主動參與重大主題報道反映著新聞媒體傳播取向的轉(zhuǎn)換和互換。