時(shí)間：2023-03-06 15:57:39
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承包人： (以下簡(jiǎn)稱乙方)
依照《中華人民共和國(guó)合同法》、《中華人民共和國(guó)建筑法》、《建設(shè)工程質(zhì)量管理?xiàng)l例》及其它有關(guān)法律、行政法規(guī)，遵循平等、自愿、公平和誠(chéng)實(shí)信用的原則，雙方經(jīng)協(xié)商一致訂立本協(xié)議。
第一條：工程概況
工程名稱： 住宅套內(nèi)及公共區(qū)域裝修工程。
一、工程地點(diǎn)：
二、工程內(nèi)容：乙方負(fù)責(zé)按甲方確認(rèn)的施工圖紙及相關(guān)設(shè)計(jì)變更通知對(duì) 住宅室內(nèi)、首層電梯大堂及電梯間、標(biāo)準(zhǔn)層電梯間裝修工程。
其它工程內(nèi)容：
第二條：承包范圍及承包方式
一、承包范圍： 室內(nèi)、首層電梯大堂及電梯間、標(biāo)準(zhǔn)層電梯間精裝修工程的施工。具體內(nèi)容包括各區(qū)域地面、天棚、墻面的裝修，入戶門、室內(nèi)護(hù)窗欄桿制安、衛(wèi)生潔具、衛(wèi)生間掛件、櫥柜、地柜、開關(guān)插座、燈具、抽油煙機(jī)、煤氣爐、消毒碗柜安裝等。
其它內(nèi)容： 。
不包含在本工程承包范圍的毛坯房和已施工的樣板房：
二、承包方式：包人工、包材料、包機(jī)械、包損耗、包工期、包質(zhì)量、包安全、包文明施工、包市場(chǎng)風(fēng)險(xiǎn)、包驗(yàn)收合格、包稅金的形式承包本項(xiàng)目。
三、乙方須按甲方的要求，提供報(bào)建相關(guān)的資料，并配合甲方進(jìn)行報(bào)建的相關(guān)工作，如因乙方原因影響甲方報(bào)建及驗(yàn)收的進(jìn)度，由此增加的費(fèi)用由乙方負(fù)責(zé)。
四、其它約定：
第三條：工程質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)按國(guó)家、地方現(xiàn)行相關(guān)規(guī)范及通用條款第9條執(zhí)行,并達(dá)到合格。
第四條：驗(yàn)收及移交
按照本合同通用條款第12條以及協(xié)議書第三條、第七條的約定進(jìn)行驗(yàn)收。
第五條：質(zhì)量保修期
本合同防水工程保修期為五年，室內(nèi)裝修工程的質(zhì)量保修期為兩年。其余未提及的均按照通用條款第13條執(zhí)行。
第六條：合同工期
一、開工日期：開工時(shí)間暫定為 年 月 日開工，具體開工日期以甲方現(xiàn)場(chǎng)管理代表簽發(fā)的開工令確定的開工日期為準(zhǔn)。
二、合同工期：(下列幾項(xiàng)根據(jù)項(xiàng)目實(shí)際情況選擇填寫)
總工期： 日歷天
工程分批進(jìn)場(chǎng)施工，每批工程工期： 日歷天
單棟工期為： 日歷天
節(jié)點(diǎn)工期：
三、竣工日期： 具體竣工日期以甲方現(xiàn)場(chǎng)管理代表簽發(fā)的開工令日期及合同總工期確定。
各樓棟竣工日期：
四、節(jié)點(diǎn)工期要求：甲方可以根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)的施工條件，合理安排本合同工程項(xiàng)目進(jìn)行分段施工，乙方應(yīng)按甲方現(xiàn)場(chǎng)管理代表下發(fā)的分段施工指令組織施工。
第七條：材料的供應(yīng)及計(jì)價(jià)
一、由乙方自行選擇供貨商進(jìn)行采購(gòu)的材料由乙方在簽訂合同前按照甲方確認(rèn)的設(shè)計(jì)圖紙要求注明的顏色、質(zhì)量、質(zhì)感、規(guī)格、品牌送實(shí)物樣品供甲方確認(rèn)，經(jīng)甲方確認(rèn)后，作為實(shí)物樣板封存，并由乙方按甲方確認(rèn)的實(shí)物樣板自行采購(gòu)。
二、乙方應(yīng)根據(jù)材料需進(jìn)場(chǎng)的時(shí)間，在圖紙下發(fā)后7天內(nèi)，以書面形式提交屬于代供代扣代付的材料進(jìn)場(chǎng)計(jì)劃報(bào)工程師審核，計(jì)劃須包含品種、規(guī)格、等級(jí)、數(shù)量、品牌及進(jìn)場(chǎng)時(shí)間等內(nèi)容。如設(shè)計(jì)變更需取消原材料計(jì)劃，應(yīng)在變更下發(fā)后3天內(nèi)通知甲方(代供代扣代付材料已按計(jì)劃進(jìn)場(chǎng)后，因甲方設(shè)計(jì)變更所導(dǎo)致的相關(guān)責(zé)任均由甲方承擔(dān))。如因乙方未及時(shí)提交代供代扣代付材料進(jìn)場(chǎng)計(jì)劃或提交錯(cuò)漏計(jì)劃，導(dǎo)致甲方不能及時(shí)進(jìn)行代供代扣代付材料采購(gòu)或采購(gòu)錯(cuò)漏時(shí)，一切不利后果均由乙方自行承擔(dān)。若代供代扣代付材料的進(jìn)場(chǎng)未滿足乙方提交的材料進(jìn)場(chǎng)計(jì)劃的要求，屬甲方原因所造成的損失和因此延誤的工期責(zé)任經(jīng)甲方確認(rèn)后，由甲方承擔(dān);
三、代供代扣代付材料由甲方負(fù)責(zé)運(yùn)到工地，乙方在送貨單上核對(duì)并簽認(rèn)，并由乙方負(fù)責(zé)代供代扣代付材料的卸車、場(chǎng)內(nèi)運(yùn)轉(zhuǎn)、清點(diǎn)、驗(yàn)貨、接收、保管、切割磨邊加工等一切后續(xù)工作，以上工作(包括期間的損耗、損失)涉及的費(fèi)用已包含在合同價(jià)中，甲方不另行支付費(fèi)用。
四、甲方代供代扣代付材料的品牌、型號(hào)、價(jià)格以施工現(xiàn)場(chǎng)收貨單為準(zhǔn)，甲方代供代扣代付材料的價(jià)格按本合同附件 及附件 《甲方代供代扣代付材料單價(jià)清單》。甲方代供代扣代付材料的總損耗率見本合同附件 ～附件 、附件 ～附件 ，本合同附件 ～附件 、附件 ～附件 的總損耗率結(jié)算時(shí)不作調(diào)整。乙方領(lǐng)用甲方代供代扣代付材料的總數(shù)量=施工項(xiàng)目工程量×(1+總損耗率)，超出此數(shù)量范圍的甲乙雙方重新核定后乙方方可領(lǐng)用，超出部分的材料費(fèi)用(含采保費(fèi)和稅金)由乙方承擔(dān)。
五、所有代供代扣代付材料的送檢由乙方負(fù)責(zé)，檢測(cè)費(fèi)用由甲方承擔(dān)，乙方先行墊付，由甲方現(xiàn)場(chǎng)管理代表在相關(guān)收費(fèi)票據(jù)上簽字確認(rèn)后與最近的進(jìn)度款一并支付。
六、代供代扣代付材料送檢不合格所造成的一切后果由甲方承擔(dān)，且延誤的工期相應(yīng)順延。
第八條：合同價(jià)
一、暫定總價(jià)(含甲方代供代扣代付材料)：人民幣 (￥ 元)。
二、計(jì)價(jià)方式
1、住宅套內(nèi)裝修工程(不包括： )
(1)采用每平米套內(nèi)面積單價(jià)包干的方式，具體每個(gè)戶型的每平方米套內(nèi)面積包干單價(jià)見本合同附件 。每個(gè)戶型的每平米套內(nèi)面積包干單價(jià)的造價(jià)分析見本合同附件 ～附件 。
(2)工程量的計(jì)算：根據(jù)施工竣工圖按實(shí)際完成工程量計(jì)算。結(jié)算按實(shí)際完成戶型的套內(nèi)面積乘以對(duì)應(yīng)戶型的合同單價(jià)結(jié)算。套內(nèi)面積計(jì)算規(guī)則為：各套公用墻(包括各套之間、各套與公共建筑間的分隔墻及外墻)的中心線所圍的水平投影面積計(jì)算(中心線以外的飄窗臺(tái)面積不計(jì)算裝修面積);陽臺(tái)裝修面積(含封閉陽臺(tái))按水平投影凈面積(不含外墻)的一半計(jì)算，露臺(tái)不計(jì)算面積。
(3)套內(nèi)面積包干單價(jià)已經(jīng)包含了該項(xiàng)工程項(xiàng)目施工圖中所有的及施工圖中沒有說明但在施工過程中為完成該項(xiàng)工程必須完成的所有工作，如該項(xiàng)工程描述存在漏項(xiàng)、測(cè)誤亦視為已經(jīng)包含在該項(xiàng)包干單價(jià)中，不得另增加費(fèi)用。
(4)住宅套內(nèi)面積包干單價(jià)不含入戶門、入戶門檻石、弱電的管線(除有線電視線外)及插座面板(除寬頻電視插座外)、入戶總電箱等。其它不包含內(nèi)容：
2. 公共區(qū)域裝修工程(包括首層入戶大堂及首層電梯間、標(biāo)準(zhǔn)層電梯間，其它包含的內(nèi)容： )
(1)采用含稅單項(xiàng)單價(jià)包干方式。具體的包干單價(jià)詳見附件 ～附件 、附件 ～附件 。
(2)計(jì)算規(guī)則為：各單項(xiàng)子目按實(shí)際發(fā)生工程量結(jié)算。
(3)單項(xiàng)包干單價(jià)已經(jīng)包含了施工圖或報(bào)價(jià)清單中沒有說明但在施工過程中為完成本項(xiàng)工程必須完成的所有工作，如有測(cè)誤亦視為已經(jīng)包含在清單包干價(jià)中，不得另增加費(fèi)用。
3、按以上計(jì)價(jià)方式計(jì)算的工程造價(jià)包含的內(nèi)容：人工費(fèi)、機(jī)械費(fèi)、材料費(fèi)(含代供代扣代付材料的卸車、場(chǎng)內(nèi)運(yùn)轉(zhuǎn)、清點(diǎn)、驗(yàn)貨、接收、保管等一切后續(xù)工作所發(fā)生的費(fèi)用在內(nèi))、搭拆腳手架工料費(fèi)用、石材磨邊、材料加工(含甲供塊料加工)、開槽、防污、防水、以及幕墻防污防腐防火防水防雷、鋼型材除銹防腐費(fèi)、吊裝費(fèi)、工程及材料(乙方自行采購(gòu)的材料)所須的各種檢測(cè)費(fèi)及試驗(yàn)費(fèi)(包含幕墻的“四性”試驗(yàn)檢測(cè)費(fèi)和實(shí)驗(yàn)的試件材料費(fèi)及安裝人工費(fèi))、各種材料損耗費(fèi)、卸車費(fèi)、材料場(chǎng)內(nèi)二次運(yùn)輸費(fèi)、負(fù)責(zé)其它專業(yè)承包人施工收邊收口產(chǎn)生的費(fèi)用、技術(shù)處理費(fèi)、保管費(fèi)、合同工期內(nèi)的趕工費(fèi)、施工水電費(fèi)、技術(shù)措施費(fèi)、已完工程及設(shè)備保護(hù)措施費(fèi)、安全文明施工費(fèi)、雨季或異常氣候施工措施費(fèi)、成品保護(hù)費(fèi)、垃圾清運(yùn)到甲方指定地點(diǎn)堆放費(fèi)用、工程完工驗(yàn)收前清潔費(fèi)、遠(yuǎn)程施工增加費(fèi)、現(xiàn)場(chǎng)經(jīng)費(fèi)、綜合管理費(fèi)、利潤(rùn)、稅金及其他一切費(fèi)用。
4、包干單價(jià)不含主體配合費(fèi)，由甲方另行支付給主體單位。
5、主體單位的配合內(nèi)容為：詳見第十一條
6、若由甲方提供水、電源，則水電費(fèi)按甲方實(shí)際代繳數(shù)額由甲方從乙方的每一次工程進(jìn)度款中扣除。
7、乙方負(fù)責(zé)其它專業(yè)(土建專業(yè)除外)的樓板或墻體穿洞的收邊收口等工作，此部分費(fèi)用包含在清單包干價(jià)中，甲方不予另行簽證。
8、甲方只負(fù)責(zé)提供施工現(xiàn)場(chǎng)堆放材料的場(chǎng)地，乙方自行解決施工及管理人員住宿辦公場(chǎng)所，甲方不予補(bǔ)償費(fèi)用。
9、甲方只提供現(xiàn)有的垂直運(yùn)輸設(shè)備;若裝修單位在主體單位拆除垂直運(yùn)輸設(shè)備后進(jìn)場(chǎng)，則由裝修單位自行解決運(yùn)輸問題，相關(guān)費(fèi)用已包含在合同價(jià)格中;裝修單位不準(zhǔn)使用客梯進(jìn)行運(yùn)輸?！?/p>
10、乙方進(jìn)場(chǎng)前，由甲方組織乙方、總包定位、監(jiān)理單位對(duì)土建、裝飾施工界面進(jìn)行勘測(cè)、交驗(yàn)、核對(duì)，并形成書面文字備案;若甲方未及時(shí)組織四方進(jìn)行界面交驗(yàn)，因此造成工期延誤的，經(jīng)甲方確認(rèn)后，可以順延工期。
三、調(diào)價(jià)方法：
(一)住宅套內(nèi)裝修工程
1、除甲方原因引起的設(shè)計(jì)變更、甲方代供代扣代付材料變更外，本合同執(zhí)行期間，面積包干單價(jià)不因任何因素而作調(diào)整。若因甲方設(shè)計(jì)原因引起的設(shè)計(jì)變更，本合同附件 ～附件 已有的項(xiàng)目按合同附件 ～附件 的項(xiàng)目單價(jià)執(zhí)行，合同附件 ～附件 外的項(xiàng)目，由雙方協(xié)商對(duì)變更部分的造價(jià)增減進(jìn)行約定。
2、若因甲方原因變更甲方代供代扣代付材料，則附件 ～附件 欄目中除主材基價(jià)按雙方簽字確認(rèn)的工地收貨單上的價(jià)格調(diào)整外，其它費(fèi)、取費(fèi)表不作調(diào)整，甲方代供代扣代付材料總損耗率除材料規(guī)格變化外其他因素發(fā)生變化不作調(diào)整
(二)公共部分裝修工程
1、除甲方原因引起的設(shè)計(jì)變更外，本合同執(zhí)行期間，包干單價(jià)不因任何因素而作調(diào)整。若因甲方設(shè)計(jì)原因引起的設(shè)計(jì)變更，本合同附件 ～附件 已有的項(xiàng)目按合同附件 ～附件 的項(xiàng)目單價(jià)執(zhí)行，合同附件 ～附件 外的項(xiàng)目，由甲方簽證，雙方協(xié)商簽訂補(bǔ)充協(xié)議，對(duì)變更部分的造價(jià)增減進(jìn)行約定。
2、若因甲方原因變更甲方代供代扣代付材料的品種、規(guī)格或者價(jià)格時(shí)，則附件 ～附件 欄目中除主材基價(jià)按雙方簽字確認(rèn)的工地收貨單上的價(jià)格調(diào)整外，其它費(fèi)、取費(fèi)表不作調(diào)整，甲方代供代扣代付材料總損耗率除材料規(guī)格變化外其他因素發(fā)生變化不作調(diào)整。
(三)本合同適用于下列第 種情況
第1種情況：本合同附件 ～附件 中的組成套內(nèi)裝修單元面積包干單價(jià)的“各戶型單套工程量”和附件 的“單套套內(nèi)面積”及附件 ～附件 、附件 ～附件 中甲方代供代扣代付材料中的拋光磚和瓷片的“材料總損耗率”為暫定，待詳細(xì)圖紙下發(fā)后1個(gè)月內(nèi)雙方根據(jù)施工圖紙重新核對(duì)“各戶型單套工程量” 、甲方代供代扣代付材料中的拋光磚和瓷片的“材料總損耗率”和“單套套內(nèi)面積”，并根據(jù)核對(duì)后的結(jié)果以補(bǔ)充協(xié)議書的形式調(diào)整本合同造價(jià)。(本條適用于未出詳細(xì)圖紙情況)
第2種情況：本合同附件 中的組成套內(nèi)裝修單元面積包干單價(jià)的“各戶型單套工程量”和附件 的“單套套內(nèi)面積”已核對(duì)完畢，除甲方原因引起的設(shè)計(jì)變更、甲方代供代扣代付材料價(jià)格變更及甲方代供代扣代付材料中的拋光磚和瓷片的“材料總損耗率”變更外，本合同執(zhí)行期間，各套內(nèi)戶型清單子目數(shù)量及面積包干單價(jià)不因任何因素而作調(diào)整。(本條適用于已出詳細(xì)圖紙情況)
第九條：付款時(shí)間、條件與付款方式
一、合同簽訂，乙方進(jìn)場(chǎng)施工后7天內(nèi)，甲方支付乙方合同暫定總價(jià)并扣除甲方代供代扣代付材料款、 后金額的10%作為工程備料款。若工程分期分批施工，甲方按分期分批施工部分 合同暫定價(jià)扣除甲方代供代扣代付材料款后金額的10%作為工程備料款。
其它約定：
二、乙方每30天申報(bào)一次進(jìn)度款，經(jīng)核實(shí)后7天內(nèi)甲方按乙方當(dāng)期實(shí)際完成工程量金額(含簽證)扣除已使用(包括損耗)的甲方代供代扣代付材料款后的70%作為工程進(jìn)度款，當(dāng)期領(lǐng)用但未使用的甲方代供代扣代付材料的款項(xiàng)應(yīng)在領(lǐng)用之日起第60天后申報(bào)的第一筆進(jìn)度款中按70%的比例扣除完畢，不足扣的在下一筆進(jìn)度款中扣完，在最后一次進(jìn)度款中，扣除乙方已領(lǐng)用的全部甲方代供代扣代付材料款(含乙方庫存部分)的剩余金額，進(jìn)度款不足抵扣的,在結(jié)算款中扣除。
即：當(dāng)期實(shí)際支付的進(jìn)度款=(當(dāng)期實(shí)際完成工程量金額-當(dāng)期使用(包括損耗)的甲方代供代扣代付材料款-當(dāng)期滿足扣減條件的領(lǐng)用但未使用的甲方代供代扣代付材料款)×70%。
三、工程竣工驗(yàn)收合格，承包人應(yīng)在30天內(nèi)向發(fā)包人遞交竣工結(jié)算報(bào)告及相關(guān)資料，辦理結(jié)算后30天內(nèi)，甲方累計(jì)支付乙方至實(shí)際工程結(jié)算價(jià)的97.5%，甲方應(yīng)支付的款項(xiàng)應(yīng)扣除甲方代供代扣代付材料款、工程備料款、工程進(jìn)度款、 。
四、工程結(jié)算價(jià)的2.5%作為保修金，待工程竣工驗(yàn)收合格滿兩年后如無質(zhì)量問題、無發(fā)生甲方代扣代付維修費(fèi)用，則甲方在30天內(nèi)無息支付2.3%，其余0.2%待防水工程五年質(zhì)保期滿后如無質(zhì)量問題、無發(fā)生甲方代扣代付維修費(fèi)用，則甲方在30天內(nèi)無息付清保修金。
五、乙方在領(lǐng)取每一次工程款時(shí)須向甲方提交建安發(fā)票，發(fā)票金額為包含甲方代供代扣代付材料在內(nèi)的裝修造價(jià)，甲方同時(shí)向乙方提交甲方代供代扣代付材料等額材料發(fā)票，乙方向甲方開具的工程發(fā)票的累計(jì)金額為含甲方代付代扣材料款在內(nèi)的工程總價(jià)。
第十條：現(xiàn)場(chǎng)移交標(biāo)準(zhǔn)
場(chǎng)地移交標(biāo)準(zhǔn)：
1、內(nèi)墻抹灰、衛(wèi)生間沉箱回填及找平完成。
2、垃圾清理干凈，樓面不得留有浮渣。
3、
第十一條：施工配合和總包服務(wù)內(nèi)容
1、總承包單位提供現(xiàn)有室內(nèi)外垂直運(yùn)輸及室外腳手架供乙方運(yùn)輸材料、設(shè)備、機(jī)械(大、中型設(shè)備、機(jī)械除外)，乙方對(duì)垂直運(yùn)輸設(shè)備的使用須服從甲方的整體安排，乙方須對(duì)室內(nèi)垂直運(yùn)輸設(shè)備進(jìn)行保護(hù)，由乙方承擔(dān)因室內(nèi)垂直運(yùn)輸設(shè)備保護(hù)不利造成的損失
2、總承包單位負(fù)責(zé)施工垃圾及余泥外運(yùn)。乙方將垃圾及余泥堆放至總承包單位指定的地點(diǎn)(但甲方與總承包單位指令出現(xiàn)矛盾的，以甲方的為準(zhǔn))，由總承包單位負(fù)責(zé)外運(yùn);若發(fā)現(xiàn)乙方的建筑垃圾亂堆放，作業(yè)面清理不到位，在甲方工程師的見證下,總承包單位有權(quán)派人將作業(yè)面清理，對(duì)于所發(fā)生的人工、機(jī)械等費(fèi)用，甲方可以在乙方當(dāng)期進(jìn)度款中轉(zhuǎn)扣給總承包單位。
3、總承包單位每棟每單元提供水電源點(diǎn)(如不能提供水電源點(diǎn),也可按總承包單位現(xiàn)有水電源點(diǎn)情況適當(dāng)提供,但須滿足本工程施工接取水電源的需要)，乙方需自行安裝水表、電表并承擔(dān)水、電費(fèi)(須分?jǐn)偪偙砭€路損耗)，將由乙方自行繳交給主體施工總承包人。
4、總承包單位及時(shí)提供裝修工作面以及符合要求的標(biāo)高線(水平線)及軸線(垂直線)。
5、乙方進(jìn)場(chǎng)施工時(shí)，在甲方或委托的監(jiān)理組織下，乙方應(yīng)與總承包單位辦理場(chǎng)地移交手續(xù)，以明確所移交場(chǎng)地的范圍、條件及相互責(zé)任。
6、總承包單位負(fù)責(zé)土建修補(bǔ)工作，因乙方原因而需要重復(fù)打鑿所產(chǎn)生的修補(bǔ)或由于乙方的錯(cuò)誤而導(dǎo)致的返修、返工等引起的修補(bǔ)，由乙方自行修補(bǔ)并承擔(dān)費(fèi)用。
7、乙方在進(jìn)場(chǎng)前，須與總承包單位簽訂文明施工、安全生產(chǎn)協(xié)議書及臨水臨電供應(yīng)協(xié)議書，否則，總承包單位有權(quán)拒絕乙方的進(jìn)場(chǎng)，導(dǎo)致的工期延誤及其他損失，全部由乙方承擔(dān)。
8、乙方所有臨時(shí)建筑物、構(gòu)筑物、排柵、場(chǎng)地等，應(yīng)按經(jīng)甲方批準(zhǔn)的施工組織設(shè)計(jì)進(jìn)行搭建(施工現(xiàn)場(chǎng)不許搭建生活設(shè)施)。在施工過程中一旦發(fā)生臨時(shí)設(shè)施需要拆除或遷移時(shí)，乙方應(yīng)服從并負(fù)責(zé)拆除或遷移，其費(fèi)用已綜合考慮在合同價(jià)中，不另計(jì)取。
第十二條：雙方現(xiàn)場(chǎng)代表
一、甲方授權(quán) 為現(xiàn)場(chǎng)管理代表，監(jiān)督檢查工程質(zhì)量、進(jìn)度、負(fù)責(zé)設(shè)計(jì)圖紙的變更，工程期間的質(zhì)量驗(yàn)收及其他事宜。
二、乙方委派 為項(xiàng)目經(jīng)理。委派的項(xiàng)目經(jīng)理須持有與工程項(xiàng)目相適應(yīng)的真實(shí)有效的資格證書，負(fù)責(zé)施工期間的施工質(zhì)量、安全等問題。
三、乙方應(yīng)至少任命一位稱職的一級(jí)項(xiàng)目經(jīng)理(或一級(jí)建造師)常駐工地，作為負(fù)責(zé)施工管理和合同履行的代表，此項(xiàng)目經(jīng)理的人選必須經(jīng)甲方審批。
四、乙方委派的項(xiàng)目經(jīng)理、技術(shù)負(fù)責(zé)人須持有與工程項(xiàng)目相適應(yīng)的真實(shí)有效的資格證書，項(xiàng)目經(jīng)理須從事同類專業(yè)工程施工管理工作經(jīng)歷5年以上，并具有同類工程施工經(jīng)驗(yàn)，負(fù)責(zé)施工期間的施工質(zhì)量、安全等問題。甲方任何發(fā)給此項(xiàng)目經(jīng)理的指令將視為已有效地發(fā)給乙方。技術(shù)負(fù)責(zé)人須具有中級(jí)或中級(jí)以上技術(shù)職稱，并具有同類工程管理經(jīng)驗(yàn)。
五、在正常工作時(shí)間內(nèi)，乙方項(xiàng)目經(jīng)理、技術(shù)負(fù)責(zé)人每天離開工地現(xiàn)場(chǎng)超過4小時(shí)，必須向甲方駐現(xiàn)場(chǎng)代表請(qǐng)假并獲得批準(zhǔn)后方可離開;乙方項(xiàng)目經(jīng)理離開期間，乙方項(xiàng)目副經(jīng)理或技術(shù)負(fù)責(zé)人履行項(xiàng)目經(jīng)理的義務(wù)。
六、乙方項(xiàng)目經(jīng)理、技術(shù)負(fù)責(zé)人每個(gè)月累計(jì)離開現(xiàn)場(chǎng)時(shí)間不得超過三個(gè)日歷天;項(xiàng)目經(jīng)理、技術(shù)負(fù)責(zé)人當(dāng)月累計(jì)離開現(xiàn)場(chǎng)時(shí)間超出三天的，每超出一天，乙方承擔(dān)5000元的違約金，此后每天的違約金按20xx元遞增;施工過程中，甲方有權(quán)力指令乙方撤換不能勝任、玩忽職守的項(xiàng)目管理人員(包括項(xiàng)目經(jīng)理、副經(jīng)理及施工管理人員)或班組，乙方必須服從并執(zhí)行。
七、乙方派駐本工程項(xiàng)目的管理人員名單見合同附件，乙方未經(jīng)甲方同意不可更換項(xiàng)目經(jīng)理、項(xiàng)目副經(jīng)理或技術(shù)負(fù)責(zé)人，否則乙方應(yīng)向甲方支付違約金5萬元/人，同時(shí)甲方保留單方解除合同的權(quán)利，特殊情況須經(jīng)甲方同意。甲方在施工現(xiàn)場(chǎng)設(shè)立指紋考勤機(jī)對(duì)項(xiàng)目管理人員進(jìn)行考勤管理。
第十三條：其他約定
一、乙方在投標(biāo)過程中已仔細(xì)察看過招標(biāo)樣板，并熟知甲方對(duì)相關(guān)的材料的要求，如乙方提供的材料樣板無法達(dá)到甲方的要求，乙方承諾按照甲方提供的招標(biāo)樣板施工，相應(yīng)項(xiàng)目的綜合單價(jià)不作調(diào)增。
二、本合同簽訂后3個(gè)日歷天內(nèi)，乙方應(yīng)向甲方提供合同暫定總價(jià) 0.5%的履約保證金或 3% 的履約銀行保函。乙方未依本約定提供履約保證金或履約銀行保函的，甲方有權(quán)從乙方的任何一筆工程款中抵扣。
三、乙方必須做好現(xiàn)場(chǎng)已完工項(xiàng)目成品保護(hù)工作，重點(diǎn)做好入戶門、地毯、地板、石材地面部分完工項(xiàng)目成品保護(hù)工作，若成品保護(hù)措施不到位出現(xiàn)問題，乙方需無條件服從甲方要求整改、修復(fù)或賠償甲方委托第三方單位修復(fù)費(fèi)用。
四、在工程施工過程中，若甲方要求增加施工人員，則乙方應(yīng)無條件按甲方要求執(zhí)行。由此而增加的費(fèi)用已在相應(yīng)的單價(jià)中綜合考慮，該部分費(fèi)用不另行增加。
五、乙方在工程竣工驗(yàn)收時(shí)，應(yīng)按甲方要求，向甲方提供符合國(guó)家城建檔案管理部門的要求規(guī)格編制成冊(cè)的工程竣工圖及有關(guān)的技術(shù)文件檔案資料，并確保通過建設(shè)工程檔案專項(xiàng)驗(yàn)收，取得符合驗(yàn)收備案要求的《建設(shè)工程檔案驗(yàn)收意見書》。
六、乙方必須為從事危險(xiǎn)作業(yè)的職工辦理意外傷害保險(xiǎn)，并為施工場(chǎng)地內(nèi)自有人員生命財(cái)產(chǎn)和施工機(jī)械設(shè)備辦理保險(xiǎn)，支付保險(xiǎn)費(fèi)用。
七、乙方承諾就甲方代供代扣代付材料與甲方及代供代扣代付材料供應(yīng)商簽訂《代付代扣材料物資款三方協(xié)議》，此合同作為甲方受乙方委托代供代扣代付材料物資款給代供代扣代付材料供應(yīng)商的依據(jù)。
八、代供代扣代付材料供應(yīng)商每月收到乙方委托甲方代付的材料物資款后，代供代扣代付材料供應(yīng)商應(yīng)于收款時(shí)開具等額發(fā)票給乙方，此發(fā)票由甲方轉(zhuǎn)給乙方。
九、乙方認(rèn)同《民工權(quán)益保障承諾書》內(nèi)容，并作出慎重承諾，具體內(nèi)容詳見：附件。
十、甲方通訊地址: ，郵政編碼為： ，乙方依本地址向甲方發(fā)送有關(guān)信函文件，甲方如變更上述地址應(yīng)及時(shí)通知乙方，避免發(fā)生延誤。
十一、乙方通訊地址： ，郵政編碼為： ，甲方依本地址向乙方發(fā)送有關(guān)信函文件，因乙方所留地址有誤或變更地址未通知甲方的責(zé)任由乙方承擔(dān)，甲方向乙方所發(fā)送的信函文件等視為已送達(dá)乙方。
十二、乙方負(fù)責(zé)清除和外運(yùn)在施工過程中產(chǎn)生的一切垃圾，包括設(shè)計(jì)修改、增加工程產(chǎn)生的垃圾，按甲方的要求將垃圾堆于工地內(nèi)自然地面上的指定地點(diǎn)。工程竣工前負(fù)責(zé)完成場(chǎng)地清理(包括建筑物周圍的余泥及其他堆積物，臨時(shí)的施工和生活設(shè)施拆除)。乙方須在甲方要求時(shí)間前完成場(chǎng)地清理，逾期未完成，甲方有權(quán)自行處理，乙方承擔(dān)一切費(fèi)用。
十三、雙方當(dāng)事人在自愿、平等的基礎(chǔ)上對(duì)“通用條款”進(jìn)行了協(xié)商。乙方對(duì)于“通用條款”的修改意見，已經(jīng)完整地包括在本協(xié)議書中。雙方自愿遵守“通用條款”中未修改的部分和本協(xié)議書。
十四、如甲方工作人員明示或暗示要求宴請(qǐng)、招待，或索取禮金、禮品、禮券、其他利益，或故意刁難、顯失公平現(xiàn)象，乙方可以向甲方監(jiān)察部門進(jìn)行舉報(bào)。
十五、其它約定：
第十四條：合同生效
一、本合同自雙方簽字蓋章后生效。
二、本合同文本壹式肆份，甲方、乙方雙方各執(zhí)貳份，各份具同等法律效力。合同發(fā)生糾紛協(xié)商不成時(shí)，雙方約定由工程所在地人民法院裁判。
發(fā)包人(蓋章)： 承包人(蓋章)：
簽約代表： 簽約代表：
承包方：_________，簡(jiǎn)稱乙方；
企業(yè)經(jīng)營(yíng)者：_________。
甲、乙雙方根據(jù)_________，經(jīng)協(xié)商簽訂本合同。
一、承包形式
上繳利潤(rùn)定額包干，超額全留。
二、承包期限
自_________年_________月_________日起至_________年_________月_________日止，共_________年。
三、上交利潤(rùn)定額
1．乙方在_________年內(nèi)，上交利潤(rùn)總額為_________元。其中，_________年_________元，_________年_________元，_________年_________元。
2．超出定額部分的利潤(rùn)，全部留給乙方。
3．乙方應(yīng)根據(jù)留利數(shù)額，建立生產(chǎn)發(fā)展基金，獎(jiǎng)勵(lì)基金和福利基金。三項(xiàng)基金的比例為：_________。
四、經(jīng)濟(jì)技術(shù)指標(biāo)：_________。
五、技術(shù)改造任務(wù)：_________。
六、承包前債權(quán)債務(wù)的處理辦法：_________。
七、貸款歸還辦法：_________。
八、承包期間，甲方有權(quán)根據(jù)法律和合同的規(guī)定監(jiān)督檢查乙方的生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)情況；有權(quán)_________；
承包期間，甲方不得在法律和合同的規(guī)定之外隨意干涉乙方的生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)活動(dòng)并有義務(wù)_________。
九、承包期間，乙方享有國(guó)家法律、法規(guī)、政策規(guī)定的經(jīng)營(yíng)管理自主權(quán)。
企業(yè)經(jīng)營(yíng)者_(dá)________為乙方法定代表人，對(duì)企業(yè)經(jīng)營(yíng)管理中的下列事項(xiàng)，有依法自主決定的權(quán)利：_________。
十、違約責(zé)任：_________。
十一、對(duì)企業(yè)經(jīng)營(yíng)者的獎(jiǎng)懲：_________。
十二、爭(zhēng)議的解決辦法：_________。
十三、其他有關(guān)事項(xiàng)：_________。
十四、本合同自_________時(shí)起生效。合同正本_________，副本_________。
甲方（公章）：_________乙方（公章）：_________
法人代表（簽章）：_________企業(yè)經(jīng)營(yíng)者（簽章）：_________
摘 要 《保險(xiǎn)法》作為規(guī)制保險(xiǎn)經(jīng)營(yíng)活動(dòng)，規(guī)范保險(xiǎn)人，保護(hù)被保險(xiǎn)人和受益人的一項(xiàng)基本法律制度在現(xiàn)代國(guó)家經(jīng)濟(jì)生活中起到了不可估量的作用。新《保險(xiǎn)法》總結(jié)了以往司法實(shí)踐的有益成果并借鑒了國(guó)外先進(jìn)立法模式，對(duì)規(guī)范與保障保險(xiǎn)關(guān)系各主體有了更加具體的規(guī)定，而作為保險(xiǎn)關(guān)系各方主體權(quán)利義務(wù)的集中體現(xiàn)――保險(xiǎn)合同，表現(xiàn)的尤為突出。本文試圖通過分析保險(xiǎn)合同訂立的不同階段中產(chǎn)生的問題，旨在為進(jìn)一步完善新《保險(xiǎn)法》相關(guān)規(guī)則提供理論借鑒。
關(guān)鍵詞 新《保險(xiǎn)法》 保險(xiǎn)合同 條款
保險(xiǎn)合同的成立與一般合同成立的構(gòu)成要件相同。保險(xiǎn)合同雙方即投保人和保險(xiǎn)人雙方意思表示真實(shí)一致，保險(xiǎn)合同即告成立。在保險(xiǎn)合同訂立過程中，一方當(dāng)事人做出邀約，通常為投保人，內(nèi)容具體確定，保險(xiǎn)人在做保險(xiǎn)宣傳時(shí)若宣傳內(nèi)容具體確定的話也可認(rèn)定為邀約，另一方當(dāng)事人做出意思真實(shí)，內(nèi)容形式有效的承諾，保險(xiǎn)合同以有效承諾做出時(shí)即告成立，基本過程與普通合同并無二致。但是，對(duì)于保險(xiǎn)合同訂立的形式我們需要稍加討論。根據(jù)我國(guó)傳統(tǒng)《保險(xiǎn)法》學(xué)說，保險(xiǎn)合同是一種諾成性非要式合同，即可以以口頭形式訂立保險(xiǎn)合同。對(duì)此筆者提出，應(yīng)嚴(yán)格排除口頭形式保險(xiǎn)合同，其原因有二：一方面，保險(xiǎn)合同通常時(shí)間持續(xù)較長(zhǎng)，權(quán)利義務(wù)較為復(fù)雜，口頭形式不足以將上述權(quán)利義務(wù)準(zhǔn)確的表述及記錄下來；另一方面，保險(xiǎn)合同自成立到生效，直到保險(xiǎn)人保險(xiǎn)責(zé)任的確定中間間隔時(shí)間較長(zhǎng)，要式保險(xiǎn)合同可以有效排除雙方對(duì)于合同的矛盾分歧。雖然我國(guó)《保險(xiǎn)法》和《合同法》對(duì)此并未加以規(guī)定，依然秉承意思自由的原則，但誠(chéng)如上文所言，行政法規(guī)和保監(jiān)會(huì)制定的規(guī)章應(yīng)嚴(yán)格排除口頭形式保險(xiǎn)合同。
保險(xiǎn)人保險(xiǎn)責(zé)任的起算是整個(gè)投保過程中的重中之重，因?yàn)槠潢P(guān)系到投保人何時(shí)轉(zhuǎn)移了自身風(fēng)險(xiǎn)，保險(xiǎn)人何時(shí)具有危險(xiǎn)承擔(dān)義務(wù)，更重要的是關(guān)系到投保人能否獲得賠償。根據(jù)新《保險(xiǎn)法》第十三條，十四條的規(guī)定可推知：對(duì)于大多數(shù)保險(xiǎn)合同而言，保險(xiǎn)合同生效，保險(xiǎn)人保險(xiǎn)責(zé)任隨之開始，保險(xiǎn)合同的生效時(shí)即為保險(xiǎn)人承擔(dān)保險(xiǎn)責(zé)任的時(shí)間。但是，合同另有約定除外，也就是說，合同生效與保險(xiǎn)人保險(xiǎn)責(zé)任承擔(dān)的時(shí)間未必同步，而實(shí)踐中，這種情況占多數(shù)。保險(xiǎn)人保險(xiǎn)責(zé)任的承擔(dān)往往都是附條件的，如投保人交付首期保險(xiǎn)費(fèi)，保險(xiǎn)人承保并簽發(fā)保險(xiǎn)單等。保險(xiǎn)責(zé)任的確定具有重要的意義，但是以現(xiàn)有的法律條文，不足以充分保障投保人的權(quán)利，若保險(xiǎn)合同上規(guī)定以“保險(xiǎn)公司同意承保時(shí)為承保責(zé)任開始時(shí)”而保險(xiǎn)公司又遲遲不承保，在這段時(shí)間投保人的權(quán)益將如何保障。因此，筆者認(rèn)為對(duì)于保險(xiǎn)責(zé)任起算時(shí)間應(yīng)更加明確，方案有三：一是將此類不明確或故意模糊保險(xiǎn)責(zé)任起算時(shí)間的條款劃為無效條款，這在下面會(huì)論述到；二是對(duì)該條文進(jìn)行有利于投保人的解釋；三是盡快出臺(tái)《保險(xiǎn)法實(shí)施細(xì)則》確定一個(gè)必要時(shí)間，如規(guī)定保險(xiǎn)人在保險(xiǎn)合同成立后的十到十五個(gè)工作日內(nèi)做出承保與否等條文，對(duì)保險(xiǎn)人的承保時(shí)間加以確定性限制。
新《保險(xiǎn)法》中的保險(xiǎn)人說明義務(wù)既是本法的核心重點(diǎn)，也是一個(gè)難點(diǎn)。本文對(duì)于該義務(wù)本身不做過多分析，只對(duì)說明義務(wù)的對(duì)象進(jìn)行簡(jiǎn)要分析。新《保險(xiǎn)法》對(duì)于說明義務(wù)有了三處變動(dòng)，一是僅對(duì)于格式條文進(jìn)行說明；二是在訂約時(shí)需交付格式條文；三是對(duì)于責(zé)任免除條款的提示義務(wù)的確定。此次修改的重要意義不言而喻，但是對(duì)于其操作性筆者卻持有保留態(tài)度。對(duì)于說明義務(wù)的核心無非有兩點(diǎn)，說明對(duì)象與說明程度。根據(jù)新《保險(xiǎn)法》規(guī)定，說明對(duì)象是格式條文，當(dāng)下保險(xiǎn)業(yè)使用的保險(xiǎn)合同絕大多數(shù)都是格式合同，保險(xiǎn)人是否要逐條為投保人進(jìn)行解釋？對(duì)于說明程度法律上沿用了“明確說明”這一模糊的概念，究竟怎么樣才算明確？而對(duì)于保險(xiǎn)人進(jìn)行的說明，在事后投保人又如何舉證？這一系列問題在新《保險(xiǎn)法》中依然沒有得到解決。反觀免責(zé)條款的提示義務(wù)倒容易操作。
正如上文所言，保險(xiǎn)合同條款絕大多數(shù)是格式條款。因此，必須在立法上予以限制，保護(hù)投保人的利益?！侗ｋU(xiǎn)法》及《合同法》對(duì)此有專門規(guī)定。（一）保險(xiǎn)合同中非格式條款的效力優(yōu)于格式條款?！逗贤ā返谒氖粭l規(guī)定“格式條款與非格式條款不一致的，應(yīng)當(dāng)采用非格式條款?！北ｋU(xiǎn)合同的格式條款一般是保險(xiǎn)人一方的意思表示，而非格式條款往往是投保人與保險(xiǎn)人雙方合意的結(jié)果，是在格式條款外另行商定的條款，或?qū)υ袷綏l款重新協(xié)商修改的條款。因此，保險(xiǎn)合同非格式條款的效力應(yīng)當(dāng)優(yōu)于格式條款①。（二）如何正確理解《保險(xiǎn)法》第三十條確立的“有利于投保人和受益人解釋”原則。該規(guī)定被稱為“有利解釋”原則。但實(shí)踐中，人們往往片面理解《保險(xiǎn)法》第三十一條的規(guī)定，將這種“有利解釋”原則擴(kuò)大化加重保險(xiǎn)人的責(zé)任。筆者認(rèn)為，要正確適用《保險(xiǎn)法》的這一原則，必須結(jié)合《合同法》的有關(guān)規(guī)定對(duì)其進(jìn)行解釋?！逗贤ā返谒氖粭l規(guī)定“對(duì)格式條款的理解發(fā)生爭(zhēng)議的，應(yīng)當(dāng)按照通常理解予以解釋?！边@里所說的“通常理解”，根據(jù)《合同法》第一百二十五條的規(guī)定進(jìn)行解釋?！巴ǔ＠斫狻边€包括這樣一層意思，即應(yīng)當(dāng)按可能訂立該合同的一般人的理解來解釋合同條款，這里所講的“一般人的理解”，是指不特定的群體對(duì)有關(guān)條款的理解，不能認(rèn)為是具體某個(gè)人的理解。
注釋：
①韓秀麗.在保險(xiǎn)合同中的適用淺析.大眾商務(wù).2010.7.
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[3]韓秀麗.在保險(xiǎn)合同中的適用淺析.大眾商務(wù).2010.7.
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[5]吳定富.釋義.中國(guó)財(cái)政經(jīng)濟(jì)出版社.2009.4.
外墻石材干掛分包合同范文一承包人(全稱)：_______________________ 分包人(全稱)：_______________________
依照《中華人民共和國(guó)合同法》、《中華人民共和國(guó)建筑法》、《巨力廣場(chǎng)施工總承包合同》及其它有關(guān)法律、行政法規(guī)，遵循平等、自愿、公平和誠(chéng)實(shí)信用的原則，承包人(以下簡(jiǎn)稱甲方)和分包人(以下簡(jiǎn)稱乙方)雙方就分包工程施工事項(xiàng)經(jīng)協(xié)商達(dá)成一致，訂立本合同。
一、分包工程概況。
二、分包合同價(jià)款及承包方式：
金額：約伍佰陸拾壹萬元整。小寫：材裝飾面積330元/m2。 承包方式：設(shè)計(jì)及施工包工包料。
三、工期
1、合同工期
開工日期：本分包工程定于___年___ 月___日開工; 竣工日期：本分包工程定于___年___月___日竣工; 合同工期總?cè)諝v天數(shù)為：___天。
2、工期延誤：
因設(shè)計(jì)變更和工程量增加及一周內(nèi)非乙方原因的停水、停電或非乙方原因造成的工期延誤，甲方給予乙方工期順延，乙方要會(huì)同甲方項(xiàng)目部管理人員辦理工期延誤手續(xù);因乙方原因造成的工期延誤，甲方不予工期順延。
3、工期每拖延一天扣違約金
四、工程質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
本分包工程質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)雙方約定為：____________。
五、工程各種費(fèi)用和工程價(jià)款結(jié)算及支付方式。
1、工程結(jié)算：按照每月工程形象進(jìn)度的70%支付，余23.5%待工程驗(yàn)收合格后承包人和發(fā)包人(建設(shè)單位)辦理完竣工結(jié)算的一個(gè)月內(nèi)付清。留6.5%工程保修金，按照國(guó)家有關(guān)保修規(guī)定執(zhí)行。
2、支付方式：現(xiàn)金或轉(zhuǎn)賬支票支付工程款。
3、預(yù)借和決算承包費(fèi)均由甲方施工項(xiàng)目經(jīng)理、工程管理部、預(yù)算部、材料部簽注意見，總經(jīng)理審批同意后方可由財(cái)務(wù)部辦理付款手續(xù)。
4、凡國(guó)家規(guī)定應(yīng)由乙方承擔(dān)的有關(guān)稅、費(fèi)由乙方自行繳納。
六、安全施工及安全事故處理
1、安全施工：乙方必須執(zhí)行國(guó)家和政府部門頒布的有關(guān)安全生產(chǎn)的法律、法規(guī)及各項(xiàng)規(guī)定，嚴(yán)格按照安全操作規(guī)范組織施工。乙方未按以上規(guī)范組織施工，造成機(jī)械傷害、觸電、高處墜落、火災(zāi)等安全事故，由乙方負(fù)全部責(zé)任(包括法律責(zé)任、經(jīng)濟(jì)責(zé)任及其連帶責(zé)任)。
2、施工期間，乙方在安全管理方面，要嚴(yán)格依據(jù)《建筑安裝工人安全技術(shù)操作規(guī)程》和《建筑施工安全檢查標(biāo)準(zhǔn)(JGJ59-99)》及甲方的有關(guān)規(guī)章制度組織施工。
3、乙方組織的各工種工作人員必須執(zhí)行甲方現(xiàn)行的有關(guān)安全生產(chǎn)各項(xiàng)規(guī)章制度，接受“三級(jí)”安全教育，乙方負(fù)責(zé)人及特殊工程人員必須持證上崗，嚴(yán)禁出現(xiàn)“三違”現(xiàn)象。
4、乙方施工期間出現(xiàn)非甲方原因造成的居住、飲食(如食物中毒)、行為(如打架斗毆)等方面的人身傷亡事故，責(zé)任全部由乙方承擔(dān)(包括法律責(zé)任、經(jīng)濟(jì)責(zé)任及其連帶責(zé)任)。
5、乙方必須認(rèn)真接受甲方及建設(shè)主管部門、政府其它有關(guān)部門的安全生產(chǎn)檢查，乙方自帶的施工機(jī)械設(shè)備在各方面必須符合國(guó)家規(guī)定，如：機(jī)械性能良好，安全防護(hù)裝置齊全、靈敏、有效等，同時(shí)必須按規(guī)定為作業(yè)人員配發(fā)合格的安全勞動(dòng)防護(hù)用品。
6、乙方提供的機(jī)械設(shè)備及防護(hù)用品，如不符合產(chǎn)品質(zhì)量要求，在使用中出現(xiàn)安全事故，乙方承擔(dān)全部責(zé)任。
7、乙方對(duì)施工現(xiàn)場(chǎng)發(fā)生傷亡事故的傷員要及時(shí)護(hù)送至醫(yī)院全力進(jìn)行搶救，在保護(hù)好現(xiàn)場(chǎng)的同時(shí)立即上報(bào)甲方項(xiàng)目部，在搶救傷員移動(dòng)現(xiàn)場(chǎng)設(shè)施時(shí)，要做好記錄或拍照工作，不準(zhǔn)破壞事故現(xiàn)場(chǎng)。乙方應(yīng)積極配合甲方及當(dāng)?shù)卣块T勘察現(xiàn)場(chǎng)和調(diào)查事故，不得提供偽證。
8、不管任何原因造成的傷亡事故都由乙方自行負(fù)責(zé)與甲方無任何關(guān)系，甲方不承擔(dān)任何責(zé)任(包括法律、經(jīng)濟(jì)責(zé)任及其連帶責(zé)任)。
七、甲方的權(quán)力和義務(wù)
1、甲方有權(quán)要求乙方嚴(yán)格按照設(shè)計(jì)文件、技術(shù)交底和國(guó)家有關(guān)施工規(guī)范進(jìn)行施工，工程質(zhì)量符合本合同約定的質(zhì)量等級(jí)，達(dá)到國(guó)家建筑工程質(zhì)量等級(jí)驗(yàn)評(píng)標(biāo)準(zhǔn)要求。遵守甲方的技術(shù)質(zhì)量管理制度，否則，乙方承擔(dān)由此造成的損失。
2、甲方有權(quán)要求乙方按合同約定的期限完成所承包的工程任務(wù)量，否則，由此造成的損失由乙方承擔(dān)。
3、甲方有權(quán)依據(jù)國(guó)家或政府部門制定的有關(guān)法律、法規(guī)、和定額標(biāo)準(zhǔn)及本公司管理程序文件等對(duì)乙方施工現(xiàn)場(chǎng)的安全生產(chǎn)、文明施工、材料消耗等進(jìn)行統(tǒng)一管理、協(xié)調(diào)、調(diào)度，并有權(quán)進(jìn)行監(jiān)督和控制。
4、甲方有權(quán)對(duì)乙方的違規(guī)行為提出限期整改要求，若乙方不能按要求整改或嚴(yán)重?fù)p害甲方利益和信譽(yù)時(shí)，甲方有權(quán)將乙方清退出施工現(xiàn)場(chǎng)，同時(shí)終止合同。
5、甲方負(fù)責(zé)向乙方提供水、電、臨設(shè)及配合施工的腳手架及垂直運(yùn)輸設(shè)施。
八、乙方的權(quán)利和義務(wù)
1、乙方有權(quán)拒絕甲方下達(dá)的違反國(guó)家法律、法規(guī)及施工規(guī)范和安全操作規(guī)程的指令。
2、乙方有義務(wù)審查所屬工作人員的身份情況，保證人員的政治素質(zhì)、身體素質(zhì)和技術(shù)水平，不得雇用聾啞、智障、殘疾、無技術(shù)女工及不滿18周歲和超過55周歲的工人。
3、乙方有義務(wù)將其作業(yè)人員登記造冊(cè)(須寫明真實(shí)姓名、性別、年齡、籍貫、工種、級(jí)別、工作證號(hào)及身份證號(hào))，并報(bào)甲方備案以備教育檢查。
4、在施工生產(chǎn)過程中，乙方應(yīng)保證按期、按項(xiàng)、按量完成與甲方簽訂合同范圍內(nèi)的生產(chǎn)任務(wù)，服從甲方的統(tǒng)籌安排，統(tǒng)一調(diào)動(dòng)。
5、乙方必須按施工圖紙進(jìn)行施工，如有合理化建議報(bào)甲方審閱，經(jīng)審閱采納的建議，需辦理變更手續(xù)后方可變更。
6、乙方應(yīng)對(duì)工人進(jìn)行安全生產(chǎn)、文明施工、衛(wèi)生防疫及交通安全、明火作業(yè)、煤氣中毒等方面教育，乙方人員必須遵守甲方有關(guān)安全生產(chǎn)、消防保衛(wèi)、場(chǎng)容衛(wèi)生等規(guī)章制度，服從甲方有關(guān)人員的指導(dǎo)、教育、監(jiān)督和檢查，并及時(shí)向甲方提供有關(guān)情況和資料。
7、乙方要合理支付勞工工資，依法雇用和清退勞工，因拖欠勞工工資引起糾紛，一切責(zé)任由乙方承擔(dān)。
8、乙方遵守項(xiàng)目部制定的規(guī)章制度。
九、違約責(zé)任
本合同雙方不得違約，如有違約，由違約方承擔(dān)違約責(zé)任，并賠償給對(duì)方造成的經(jīng)濟(jì)損失。
十、附則
1、本合同一式四份，自雙方簽字(蓋章)后生效，雙方結(jié)清工程價(jià)款即終止。
2、本合同未盡事宜雙方另議。
承包人：(公章) 分包人：(公章)
年月日：
外墻石材干掛分包合同范文二一、工程概況
1、工程名稱： 2、工程地點(diǎn)：
3、承包范圍：外墻石材干掛及龍骨架安裝
4、開工日期：年月
5、竣工日期：
6、合同單價(jià)：元/m²
二、圖紙
1、效果圖由甲方提供，乙方可根據(jù)實(shí)際進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整;
2、石材分割圖由乙方提供，費(fèi)用由乙方負(fù)責(zé)。在施工過程中，乙方可根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)施工實(shí)際情況進(jìn)行相應(yīng)的改動(dòng)，解釋權(quán)歸乙方所有。
三、施工管理
1、甲方應(yīng)該派代表駐工地，對(duì)施工現(xiàn)場(chǎng)不符合要求的部位及時(shí)提出異議，并進(jìn)行協(xié)商整改;
2、在施工進(jìn)行過程中，如果甲方代表不在或沒提出異議，過后所造成的損失應(yīng)由甲方負(fù)責(zé)，因?yàn)橐曳绞┕ぜ夹g(shù)問題造成甲方的損失全部由乙方負(fù)責(zé)賠償。
3、乙方在施工過程中應(yīng)當(dāng)盡量提出一些合理化建議，一旦某些建議為甲方創(chuàng)造更多的利潤(rùn)，甲方可以考慮給予乙方適當(dāng)?shù)莫?jiǎng)勵(lì)。
三、物資供應(yīng)
1、甲方負(fù)責(zé)全部材料的供應(yīng)，并負(fù)責(zé)送達(dá)乙方指定的地點(diǎn);
2、工程所需材料如因供應(yīng)部門的規(guī)格品種、顏色或材質(zhì)不能滿足工程所需要求，必須以其他規(guī)格品種代替或人工加工處理石材切割和磨邊時(shí)，由于代用或加工而發(fā)生的量差、價(jià)差及加工費(fèi)，由甲方負(fù)擔(dān)，每平米按原價(jià)算外增加費(fèi)用由乙方書面提出，并由甲方代表現(xiàn)場(chǎng)審定簽字為準(zhǔn)。
3、乙方負(fù)責(zé)提供小型石材切割機(jī)、鋼材切割機(jī)、鉆孔機(jī)、電焊機(jī)、紅外線測(cè)量?jī)x等，甲方負(fù)責(zé)供應(yīng)的主材、施工設(shè)備耗材、現(xiàn)場(chǎng)施工配電箱及主線、石材大型切割機(jī)、運(yùn)輸設(shè)備等，如未按期供應(yīng)或規(guī)格質(zhì)量不符要求等原因，經(jīng)雙方共同努力仍無法解決的，因此造成乙方的損失，由甲方負(fù)擔(dān)。
4、如石材加工沒有按圖紙料單加工，所造成的損失由甲方負(fù)責(zé)，比如石材沒磨邊倒角，由乙方加工甲方應(yīng)按每米5元付給乙方。下料單由乙方負(fù)責(zé)，并經(jīng)過甲方代表審核。
五、安全
1、甲方對(duì)乙方承擔(dān)的工程要做安全交底，提出明確的安全要求，并進(jìn)行監(jiān)督檢查，乙方必須認(rèn)真貫徹有關(guān)安全施工的規(guī)章制度，嚴(yán)格遵守安全操作規(guī)程，對(duì)甲方提供的安全生產(chǎn)設(shè)施，乙方經(jīng)檢查合格方可使用，施工中如因違反上述規(guī)定而發(fā)生傷亡事故，其損失由乙方負(fù)責(zé)。
2、工人必須購(gòu)買工傷意外保險(xiǎn)方可以上崗作業(yè)，保險(xiǎn)費(fèi)用應(yīng)不由工人負(fù)責(zé)。
3、勞動(dòng)保護(hù)用品及施工中屬個(gè)人使用的帶電操作具如絕緣手套、膠靴等由乙方自行解決，如乙方確有困難，可提出需用計(jì)劃，甲方協(xié)助解決。
六、順延工期
在組織施工過程中，如遇下列情況，得順延工期，雙方應(yīng)及時(shí)進(jìn)行協(xié)商，并通過書面形式確定順延期限：
1、因天災(zāi)或人力不能抗拒的原因被迫停工者;
2、因甲方提出變更計(jì)劃或變更施工圖而不能繼續(xù)施工者;
3、因甲方不能按期供圖、供料、供設(shè)備或其所供材料以及設(shè)備不合規(guī)格要求，被迫停工或不能順利施工者。
七、工資
1、按進(jìn)度付款，進(jìn)程一周開始支付生活費(fèi)，工人工資根據(jù)形象進(jìn)度付款80%支付，15天支付一次，甲方不能以任何理由推遲支付。
2、因?yàn)榧追降脑蛟斐赏９商煲陨蠒r(shí)，甲方應(yīng)通過協(xié)商解決工人的誤工費(fèi)用。
2、工程完成后，甲方必須一次性付給乙方全部余款。
本合同自雙方簽字之日起生效，至工程全部竣工并結(jié)算完畢后失效。 發(fā)包甲方簽字： 承包乙方簽字：
聯(lián)系手機(jī)： 聯(lián)系手機(jī)：
年____月____日 年____月____日
外墻石材干掛分包合同范文三甲方：
乙方：
根據(jù)(中華人民共和國(guó)合同法)相關(guān)規(guī)定經(jīng)甲乙雙方協(xié)商，甲方將其所屬 外墻干掛石材工程承包給乙方具體協(xié)議如下：
一、工程概況
工程名稱：
工程地點(diǎn)：
工程內(nèi)容：外墻干掛石材單包工。
二、工期：自 年 月 日至 年 月 日 止。
三、工程要求：按甲方相關(guān)要求進(jìn)行施工。遵守國(guó)家相關(guān)規(guī)定。 做到文明施工。必須服從甲方管理。
四、價(jià)格：按照實(shí)際發(fā)生面積每平方米55元計(jì)算。
五。、工程款支付方式
1乙方進(jìn)入施工現(xiàn)場(chǎng)后，甲方付乙方生活費(fèi)5000元
2甲方按每月工程進(jìn)度70%支付乙方工程款。
3工程完成經(jīng)甲方驗(yàn)收后，剩余工程款在15個(gè)工作日之內(nèi)一次性付清。
六、安全保證
乙方施工過程中按國(guó)家相關(guān)規(guī)定保證安全生產(chǎn)，加強(qiáng)現(xiàn)場(chǎng)安全管理，按要求施工，杜絕發(fā)生一切安全問題，若因?yàn)橐曳經(jīng)]有系安全繩，戴安全帽所發(fā)生的安全事故。有乙方自行負(fù)責(zé)。甲方概不負(fù)責(zé)。
七、違約責(zé)任
1、乙方必須按要求及現(xiàn)場(chǎng)施工規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)施工。達(dá)到驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)，未到標(biāo)準(zhǔn)的及時(shí)采取補(bǔ)救措施和返工，費(fèi)用由乙方負(fù)責(zé)。乙方必須按時(shí)完工。
2、甲方需按協(xié)議要求及時(shí)付款及配套輔助工作。如因甲方原因造成一切損失由甲方負(fù)責(zé)。
3、此協(xié)議簽訂后雙方均應(yīng)認(rèn)真履行，否則按合同法有關(guān)規(guī)定視為違約。
九、 此協(xié)議一式兩份，雙方簽字后生效，如有未盡事宜雙方另行簽訂補(bǔ)充協(xié)議。
十、1、輔助材料和安全設(shè)施由甲方提供。
2、工人保險(xiǎn)費(fèi)由乙方負(fù)責(zé)。
考古發(fā)掘現(xiàn)場(chǎng)(以下簡(jiǎn)稱發(fā)掘現(xiàn)場(chǎng))動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)由發(fā)掘現(xiàn)場(chǎng)動(dòng)態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)系統(tǒng)和發(fā)掘現(xiàn)場(chǎng)無線實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)平臺(tái)兩部分組成。
發(fā)掘現(xiàn)場(chǎng)無線實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)平臺(tái)發(fā)掘現(xiàn)場(chǎng)無線實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)平臺(tái)的作用是為發(fā)掘現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)測(cè)子系統(tǒng)提供實(shí)時(shí)的數(shù)據(jù)支持,由發(fā)掘現(xiàn)場(chǎng)硬件平臺(tái)和發(fā)掘現(xiàn)場(chǎng)軟件平臺(tái)兩個(gè)部分組成。發(fā)掘現(xiàn)場(chǎng)無線實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)硬件平臺(tái)由傳感器節(jié)點(diǎn)、中繼節(jié)點(diǎn)和網(wǎng)關(guān)三個(gè)部分組成:布置在現(xiàn)場(chǎng)的數(shù)據(jù)采集節(jié)點(diǎn)負(fù)責(zé)采集實(shí)時(shí)環(huán)境數(shù)據(jù)(如大氣溫濕度、光照強(qiáng)度、降塵和有害氣體等),按照一定的路由規(guī)則將數(shù)據(jù)發(fā)送至通信范圍內(nèi)的父節(jié)點(diǎn),然后通過中繼節(jié)點(diǎn)的相互中繼,將數(shù)據(jù)不斷轉(zhuǎn)發(fā)直至到達(dá)網(wǎng)關(guān)節(jié)點(diǎn)。網(wǎng)關(guān)節(jié)點(diǎn)通過遠(yuǎn)程通信方式,如衛(wèi)星通信、Internet、GPRS等手段,將數(shù)據(jù)傳送至遠(yuǎn)程客戶終端。其中各個(gè)數(shù)據(jù)采集節(jié)點(diǎn)和中繼節(jié)點(diǎn)根據(jù)RSSI(接收信號(hào)強(qiáng)度指示)和跳數(shù)來選擇合適的中繼節(jié)點(diǎn)作為父節(jié)點(diǎn),并以此在數(shù)據(jù)采集節(jié)點(diǎn)和中繼節(jié)點(diǎn)間建立簇內(nèi)星狀網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu),中繼節(jié)點(diǎn)之間則根據(jù)RSSI值建立樹狀網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。每個(gè)傳感器節(jié)點(diǎn)和中繼節(jié)點(diǎn)在上電后自動(dòng)加入網(wǎng)絡(luò),并定期將采集到的數(shù)據(jù)沿最優(yōu)路由方向傳送至網(wǎng)關(guān)。發(fā)掘現(xiàn)場(chǎng)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)軟件平臺(tái)則由中間件、數(shù)據(jù)庫和數(shù)據(jù)采集接口三個(gè)部分組成。數(shù)據(jù)采集接口將接收到的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)存入數(shù)據(jù)庫中,中間件的作用則是將數(shù)據(jù)庫中保存的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)取出,并提供給用戶和子系統(tǒng)。
發(fā)掘現(xiàn)場(chǎng)環(huán)境監(jiān)測(cè)系統(tǒng)由于監(jiān)測(cè)系統(tǒng)需要對(duì)發(fā)掘現(xiàn)場(chǎng)的內(nèi)外環(huán)境同時(shí)進(jìn)行監(jiān)測(cè),因此發(fā)掘現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)測(cè)子系統(tǒng)由環(huán)境監(jiān)測(cè)子系統(tǒng)和氣象監(jiān)測(cè)子系統(tǒng)組成。環(huán)境系統(tǒng)檢測(cè)子系統(tǒng)主要是針對(duì)文物所處環(huán)境參數(shù),如大氣溫度、大氣相對(duì)濕度、土壤溫度、土壤水分含量、文物表面溫度、文物表面濕度、大氣二氧化碳濃度、有機(jī)揮發(fā)物總量等參數(shù)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。氣象監(jiān)測(cè)子系統(tǒng)主要是針對(duì)發(fā)掘現(xiàn)場(chǎng)所處小環(huán)境的氣象參數(shù),如光照度、紫外線強(qiáng)度、風(fēng)速、風(fēng)向、降雨量等參數(shù)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。監(jiān)測(cè)系統(tǒng)的目的在于對(duì)文物所處環(huán)境的各種參數(shù)進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘整理,精確掌握文物埋藏的環(huán)境參數(shù),實(shí)現(xiàn)對(duì)出土文物在第一時(shí)間的檢測(cè)分析以及文物出土環(huán)境參數(shù)的采集,建立環(huán)境參數(shù)歷史數(shù)據(jù)庫,為文物預(yù)防性保護(hù)提供技術(shù)支撐,并為文物保護(hù)措施的制訂提供科學(xué)依據(jù)。
案例研究
鳳棲原文物保存環(huán)境監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)分析鳳棲原張安世墓葬遺址屬于西漢宣帝時(shí)期的重臣、被封富平侯的大司馬將軍張安世。張安世在西漢的地位舉足輕重,其墓葬的出土文物進(jìn)一步證實(shí)了這一點(diǎn),出土的很多隨葬品都屬于西漢皇帝御賜物件。根據(jù)發(fā)掘現(xiàn)場(chǎng)實(shí)際狀況及需要,目前已部署七個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn),監(jiān)測(cè)時(shí)段大約在八個(gè)月左右,監(jiān)測(cè)點(diǎn)部署圖如下(圖4)。數(shù)據(jù)記錄及分析3月份期間,鳳棲原張安世墓葬遺址氣象站監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)存在較大波動(dòng)(圖5)。其中3月19日-3月21日期間,環(huán)境溫度基本保持在4℃左右,環(huán)境濕度基本保持在100%,波動(dòng)均不大,光照變化范圍也縮減至0-2000lx之間。結(jié)合當(dāng)時(shí)的天氣變化,3月天氣剛剛由寒轉(zhuǎn)暖,氣候變化較頻繁,3月19日-3月21日是降雨天氣,持續(xù)陰天,光照度較低,導(dǎo)致空氣中水分蒸發(fā)較少。3月22日停止降水后,光照開始恢復(fù),環(huán)境濕度逐漸下降,氣溫也逐漸回升(因水分揮發(fā)緩慢,恢復(fù)的較為遲緩)?？傮w來看,3月份氣象站的大氣溫度變化為0℃到23℃之間,大氣濕度在16%到75%之間,每天的照度變化最大范圍0lx到8500lx內(nèi),氣象站數(shù)據(jù)與環(huán)境數(shù)值較一致,溫度、濕度、光照度也保持合理的變化趨勢(shì)。環(huán)境變化正常,期間出現(xiàn)的特殊變化,多是天氣變化引起的。查看這一段時(shí)間82號(hào)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的土壤溫度和含水量的變化,遺址坑內(nèi)的土壤溫度和土壤水分含量變化波動(dòng)較大(圖6),其中3月19日-3月21日土壤水分含量逐漸升高(由4.34%上升至4.65%),土壤溫度也隨之逐漸降低(由10.5℃下降至5℃)。結(jié)合氣象站的監(jiān)測(cè)結(jié)果看,3月天氣變化頻繁,3月19日-3月21日為降雨天氣,室內(nèi)土壤雖然不直接受到降雨給監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)帶來的驟然變化,但由于受到外界土壤水分的滲透作用,土壤溫度和水分含量也隨之以相同的趨勢(shì)逐漸變化。3月22日停止降水后,土壤水分含量逐漸下降,土壤溫度也逐漸回升。總體來看,土壤溫度在5.2℃到13℃范圍之間、土壤含水在4.3%到4.65%范圍之間保持著較為穩(wěn)定的變化,并且二者保持相符的變化趨勢(shì)。期間出現(xiàn)的特殊變化,多是天氣變化引起的(可查看氣象站數(shù)據(jù)變化)。查看這一段時(shí)間90號(hào)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的大氣溫濕度變化,3月期間遺址環(huán)境的大氣溫濕度波動(dòng)較大(圖7)。其中3月19日-3月21日,大氣溫度由10℃驟降至1℃,大氣濕度由41%驟升至98%,變圖4監(jiān)測(cè)點(diǎn)部署圖化顯著。結(jié)合氣象站的監(jiān)測(cè)結(jié)果看,3月19日-3月21日為降雨天氣,大氣溫濕度受到直接影響帶來的突然變化。3月22日停止降水后,大氣溫度逐漸回升,大氣濕度也逐漸回落,監(jiān)測(cè)點(diǎn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確反映了監(jiān)測(cè)區(qū)域的環(huán)境變化?？傮w來看,大氣環(huán)境溫度在1℃到22℃范圍內(nèi)、大氣環(huán)境濕度在20%-98%范圍內(nèi)保持著穩(wěn)定的變化,并且二者保持相符的變化趨勢(shì)。期間出現(xiàn)的特殊變化,多是天氣變化引起的(可查看氣象站數(shù)據(jù)變化)。查看這一段時(shí)間92號(hào)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的大氣溫濕度變化,3月期間遺址環(huán)境的大氣溫濕度波動(dòng)較大(圖8)。其中3月19日-3月21日,大氣溫度由10℃驟降至0℃,大氣濕度由50%驟升至100%,變化顯著。結(jié)合氣象站的監(jiān)測(cè)結(jié)果看,3月19日-3月21日為降雨天氣,大氣溫濕度受到直接影響導(dǎo)致突然變化。3月22日停止降水后,大氣溫度逐漸回升,大氣濕度也逐漸回落,監(jiān)測(cè)點(diǎn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確反映了監(jiān)測(cè)區(qū)域的環(huán)境變化。總體來看,大氣環(huán)境溫度在0℃到22.5℃范圍內(nèi)、大氣環(huán)境濕度在20%-100%范圍內(nèi)保持著穩(wěn)定的變化,并且二者保持相符的變化趨勢(shì)。期間出現(xiàn)的特殊變化,多是天氣變化引起的(可查看氣象站數(shù)據(jù)變化)?？偨Y(jié)對(duì)比4個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的數(shù)據(jù)變化,監(jiān)測(cè)點(diǎn)的傳感量數(shù)據(jù)變化和環(huán)境變化保持一致,并且與當(dāng)時(shí)的天氣環(huán)境較一致,說明數(shù)據(jù)正確反映了監(jiān)測(cè)區(qū)域的環(huán)境變化。
高陵張棟家族墓文物保存環(huán)境監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)分析2011年陜西考古研究院專家在高陵縣涇河工業(yè)園發(fā)現(xiàn)一處罕見的完整明代家族墓園。據(jù)墓志記載,墓主人張棟生前為秦藩王府知印。這一發(fā)現(xiàn)對(duì)研究明代墓葬制度、風(fēng)俗文化具有重要作用。根據(jù)發(fā)掘現(xiàn)場(chǎng)實(shí)際狀況及需要,目前已部署十一個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn),監(jiān)測(cè)點(diǎn)部署圖如下(圖9)。說明:100號(hào)監(jiān)測(cè)點(diǎn):自動(dòng)氣象站--監(jiān)測(cè)外界環(huán)境。52、53、54、55號(hào)監(jiān)測(cè)點(diǎn):大氣溫濕度傳感器--其中53號(hào)監(jiān)測(cè)點(diǎn)監(jiān)測(cè)墓室底部到地表中間部位的環(huán)境,其他監(jiān)測(cè)點(diǎn)監(jiān)測(cè)墓室中的環(huán)境。61、62、63、64、65號(hào)監(jiān)測(cè)點(diǎn):土壤溫度、土壤水分含量傳感器--其中65號(hào)監(jiān)測(cè)點(diǎn)監(jiān)測(cè)墓室底部到地表中間部位的環(huán)境,其他監(jiān)測(cè)點(diǎn)監(jiān)測(cè)墓室中的環(huán)境。71號(hào)監(jiān)測(cè)點(diǎn):二氧化碳傳感器--監(jiān)測(cè)墓室中二氧化碳含量。數(shù)據(jù)記錄及圖形分析查看這一段時(shí)間52號(hào)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的大氣溫濕度變化,5月期間遺址環(huán)境的大氣溫濕度波動(dòng)較大(圖10)。其中5月1日-5月3日期間,濕度維持在82%-93%之間,溫度在17.5℃-22.5℃之間,基本保持在高濕、低溫的水平,晝夜溫差和濕度差較小;5月11日-5月12日溫度濕度和光照度驟變,濕度由62%升至88%,溫度由25℃降至最低17℃。
結(jié)合氣象站的監(jiān)測(cè)結(jié)果看,5月為春季末尾,氣溫總體呈緩慢上升趨勢(shì),并偶爾伴隨降雨。5月1日-5月3日、5月11日-5月12日是降雨天氣,濕度很大,氣溫較低。無降水期間,光照逐漸充裕,環(huán)境濕度逐漸下降,氣溫也逐漸回升并呈上升趨勢(shì)?？傮w來看,當(dāng)月大氣環(huán)境溫度在16℃到35℃范圍內(nèi)、大氣環(huán)境濕度在20%到98%范圍內(nèi)保持著穩(wěn)定的變化,并且二者保持相符的
變化趨勢(shì)。監(jiān)測(cè)點(diǎn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確反映了監(jiān)測(cè)區(qū)域的環(huán)境變化。期間出現(xiàn)的特殊變化,多是天氣變化引起的(可查看氣象站數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比)。查看這一段時(shí)間71號(hào)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的二氧化碳含量變化,5月期間遺址環(huán)境的二氧化碳含量波動(dòng)較大(圖11)。以5月9日為分界,5月1-9日二氧化碳含量在200-450ppm之間波動(dòng)較大且均值偏高,5月9-20日二氧化碳含量在200-330ppm之間波動(dòng)較小且均值偏低。經(jīng)調(diào)查,5月1-9日,71號(hào)監(jiān)測(cè)點(diǎn)放置于M4考古發(fā)掘現(xiàn)場(chǎng),現(xiàn)場(chǎng)白天有大量工作人員活動(dòng),白天由人體排放的二氧化碳使得空氣中二氧化碳濃度較高,夜晚則恢復(fù)至正常水平;5月9日之后,為防止因挖掘工作破壞監(jiān)測(cè)設(shè)備,工作人員將其挪至無人活動(dòng)的M5內(nèi),并以不透氣薄膜覆蓋,給71號(hào)監(jiān)測(cè)設(shè)備營(yíng)造出密閉的微環(huán)境,故而二氧化碳含量偏低且波動(dòng)較小。其中5月1日-5月3日期間,二氧化碳含量在300-430ppm之間變化幅度相對(duì)較小,基本保持在高濕、低溫、高濃度二氧化碳的水平。經(jīng)分析,因期間有降雨,空氣流通不暢,故而空氣中二氧化碳含量一直保持在較高水平且波動(dòng)較小。結(jié)合氣象站的監(jiān)測(cè)結(jié)果看,監(jiān)測(cè)點(diǎn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確反映了監(jiān)測(cè)區(qū)域的環(huán)境變化,并且三者保持相符的變化趨勢(shì)。期間出現(xiàn)的特殊變化,多是天氣變化引起的(可查看氣象站數(shù)據(jù)變化進(jìn)行對(duì)比)。查看這一段時(shí)間53號(hào)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的大氣溫濕度變化,5月期間遺址環(huán)境的大氣溫濕度波動(dòng)較大(圖12)。其中5月1日-5月3日期間,濕度維持在60%-100%之間,溫度在16-28℃之間,基本保持在高濕、低溫的水平,晝夜溫差和濕度差相對(duì)較小;5月11日-5月12日溫度濕度和光照度驟變,濕度由62%升至100%,溫度由25℃降至最低17℃,之后的3天內(nèi),濕度的最高值均能達(dá)到100%。結(jié)合氣象站的監(jiān)測(cè)結(jié)果看,5月為春季末尾,氣溫總體呈緩慢上升趨勢(shì),并伴隨偶爾降雨。5月1日-5月3日、5月11日-5月12日是降雨天氣,濕度很大,氣溫較低。無降水期間,氣溫呈緩慢上升趨勢(shì)。 結(jié)合監(jiān)測(cè)點(diǎn)的布設(shè)位置(53號(hào)節(jié)點(diǎn)布設(shè)在墓底部和地表中間位置),且通風(fēng)不暢導(dǎo)致濕度在降雨之后的3天內(nèi)并沒有立即回落,而是逐漸降低且較其他監(jiān)測(cè)點(diǎn)數(shù)據(jù)高。總體來看,監(jiān)測(cè)點(diǎn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確反映了監(jiān)測(cè)區(qū)域的環(huán)境變化,環(huán)境變化正常。期間出現(xiàn)的特殊變化,多是天氣變化引起的(可查看氣象站數(shù)據(jù)變化)。查看這一段時(shí)間65號(hào)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的土壤溫度和含水量的變化,坑內(nèi)的土壤溫度和土壤水分含量變化波動(dòng)較大(圖13),5月1-11日土壤水分含量保持在20-43%之間,土壤溫度變化范圍維持在18-21℃之間;5月12日土壤水分含量由15%突升至42%,土壤溫度峰值也由29℃大幅降至23.5℃,之后逐漸恢復(fù)至平均水平。經(jīng)調(diào)查,5月1-11日監(jiān)測(cè)設(shè)備放置于墓室內(nèi),故而受外界降雨等影響較小且緩慢,5月12日之后設(shè)備被挪至墓室外環(huán)境,由于當(dāng)日有降雨,室外濕度較大,所以監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)突增?？傮w來看,土壤溫度在19.5℃到29.5℃之間、土壤含水率在15%到43%之間保持著較為穩(wěn)定的變化,并且二者保持相符的變化趨勢(shì)。期間出現(xiàn)的特殊變化,多是天氣變化引起的(可查看氣象站數(shù)據(jù)變化)。5月份期間,高陵張棟家族墓遺址內(nèi)氣象站監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)存在較大波動(dòng)(圖14)。其中5月1日-5月3日期間,濕度維持在82-100%之間,溫度在15-23℃之間,照度在0-5000lx之間,基本保持在高濕、低溫、弱光照的水平,晝夜溫差和濕度差較小;5月11日-5月12日溫度濕度和光照度驟變,濕度由60%升至100%,溫度由22℃降至最低12℃,光照度變化范圍也縮減至0-4200lx。結(jié)合當(dāng)時(shí)的天氣變化,5月為春季末尾,氣溫總體呈緩慢上升趨勢(shì),并偶爾伴隨降雨。5月1日-5月3日、5月11日-5月12日是降雨天氣,持續(xù)陰天,光照度較低,氣溫降低。無降水期間,光照逐漸充裕,環(huán)境濕度逐漸下降,氣溫也逐漸回升并呈上升趨勢(shì)?？傮w來看,氣象站的大氣溫度在12-32.5℃之間,大氣濕度在18%-100%之間,照度變化最大范圍為0-9000lx,氣象站數(shù)據(jù)與環(huán)境數(shù)值較一致,溫度、濕度、光照度也保持合理的變化趨勢(shì)。環(huán)境變化正常,期間出現(xiàn)的特殊變化,多是天氣變化引起的?？偨Y(jié)對(duì)比4個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的數(shù)據(jù)變化,監(jiān)測(cè)點(diǎn)的傳感量數(shù)據(jù)變化和環(huán)境變化保持一致,并且與當(dāng)時(shí)的氣候環(huán)境較一致,說明數(shù)據(jù)正確反映了監(jiān)測(cè)區(qū)域的環(huán)境變化。
(二)普通高中學(xué)校招生錄取。普通高中錄取實(shí)行“分?jǐn)?shù)優(yōu)先、依據(jù)志愿、參考評(píng)價(jià)、擇優(yōu)錄取”的辦法，各縣區(qū)教育局要按照下達(dá)招生計(jì)劃基數(shù)，劃定本區(qū)域內(nèi)普通高中錄取的最低控制分?jǐn)?shù)線，劃線依據(jù)由各縣區(qū)考慮綜合因素確定，制定具體的錄取辦法，并經(jīng)縣區(qū)人民政府同意，報(bào)市教育局審核備案，提前向社會(huì)公布，統(tǒng)一組織轄區(qū)內(nèi)普通高中錄取工作。各縣區(qū)對(duì)在錄取最低控制分?jǐn)?shù)線以上、志愿滑檔的考生，采取“分?jǐn)?shù)優(yōu)先、征集志愿”的原則和辦法，在轄區(qū)內(nèi)有空缺招生計(jì)劃的普通高中學(xué)校中給予調(diào)整錄取，確保完成招生計(jì)劃。
市實(shí)驗(yàn)中學(xué)單考單招。市藝術(shù)中學(xué)依據(jù)考生中考分?jǐn)?shù)和志愿，結(jié)合藝術(shù)專業(yè)測(cè)試成績(jī)自主招生，由市教育局劃定文化課最低控制錄取分?jǐn)?shù)線。
平川中恒學(xué)校除參加平川區(qū)域內(nèi)70%計(jì)劃統(tǒng)招而外的30%計(jì)劃、靖遠(yuǎn)育才高級(jí)中學(xué)、白銀育正學(xué)校、白銀新干線高級(jí)中學(xué)和白銀陽光高級(jí)中學(xué)，在縣區(qū)下達(dá)招生計(jì)劃內(nèi)，依據(jù)中考分?jǐn)?shù)面向白銀市自主招生，由所在縣區(qū)教育局劃定最低控制錄取分?jǐn)?shù)線。
省級(jí)示范性普通高中學(xué)校不得錄取綜合素質(zhì)評(píng)價(jià)達(dá)不到“4A”的考生;市級(jí)示范和一般普通高中學(xué)校不得錄取達(dá)不到4C的考生。
不同類型的特長(zhǎng)生錄取，按照招生學(xué)校、報(bào)考人數(shù)、招生計(jì)劃，由縣區(qū)教育局劃定不同的文化課最低控制錄取分?jǐn)?shù)線，在達(dá)到文化課最低控制分?jǐn)?shù)線要求的術(shù)科合格考生中，按考生術(shù)科成績(jī)從高到低的順序擇優(yōu)錄取。國(guó)家一級(jí)、二級(jí)運(yùn)動(dòng)員、競(jìng)技型特長(zhǎng)生以及在國(guó)家、省、市級(jí)各類體育競(jìng)技、藝術(shù)展演中獲得團(tuán)體、個(gè)人前三名的運(yùn)動(dòng)員、藝術(shù)特長(zhǎng)生可不受文化課成績(jī)的限制(但必須參加中考考試)，向所在縣區(qū)教育局和報(bào)考學(xué)校提交獲獎(jiǎng)證書等有關(guān)證明材料，經(jīng)審查屬實(shí)，可直接錄取。
各縣區(qū)普通高中統(tǒng)一錄取結(jié)束后，分學(xué)校張榜公示錄取結(jié)果。凡被學(xué)校張榜公布錄取的普通高中學(xué)生，要在學(xué)校規(guī)定的報(bào)名注冊(cè)期限內(nèi)，按時(shí)到校報(bào)名注冊(cè)。無故不按時(shí)到校報(bào)名注冊(cè)的學(xué)生，視為自動(dòng)放棄入學(xué)，由此造成的后果由學(xué)生及家長(zhǎng)負(fù)責(zé)。市教育局將依據(jù)學(xué)校和縣區(qū)教育局最終審核確認(rèn)的實(shí)際報(bào)名注冊(cè)在校學(xué)生辦理學(xué)籍注冊(cè)手續(xù)。低于本縣區(qū)普通高中錄取最低控制分?jǐn)?shù)線和其他亂挖生源違規(guī)招收的學(xué)生，市教育局不予注冊(cè)學(xué)籍，產(chǎn)生的一切后果由違規(guī)學(xué)校和學(xué)生自行承擔(dān)，并追究相關(guān)人員的責(zé)任。
抵押住房保障的對(duì)象是購(gòu)房者的利益。保險(xiǎn)公司按信用保證保險(xiǎn)條款在購(gòu)房者連續(xù)三個(gè)月無法按貸款合同規(guī)定還本付息而代為還貸， 一段時(shí)期之后， 保險(xiǎn)公司要向借款人追償代付的欠款和利息， 如購(gòu)房人無力償還債務(wù)， 則保險(xiǎn)公司有權(quán)處置抵押房產(chǎn)， 這時(shí)購(gòu)房人將在遭受天災(zāi)人禍之后， 面臨著房產(chǎn)被抵押拍賣及流離失所的悲慘境地， 而這時(shí)能夠避免這種悲劇發(fā)生的險(xiǎn)種就是住房抵押貸款壽險(xiǎn)， 該項(xiàng)保險(xiǎn)保障購(gòu)房者因疾病或意外事故導(dǎo)致身故或傷殘時(shí)， 其家庭其他成員可使用保險(xiǎn)公司所提供的保證金繼續(xù)按月歸還貸款， 直至本息歸還完畢。
抵押住房保險(xiǎn)涉及購(gòu)房借款人、保險(xiǎn)公司、貸款銀行和房產(chǎn)開發(fā)商等不同利益主體，有助于抵押住房保險(xiǎn)的順利實(shí)施，有助于當(dāng)事各方在實(shí)踐中依法維護(hù)自身的合法權(quán)益。
一、抵押住房保險(xiǎn)涉及到貸款銀行、借款人、保險(xiǎn)公司三方， 他們之間有如下法律關(guān)系
1、貸款銀行與借款人之間是借款關(guān)系， 法律關(guān)系的基礎(chǔ)是借貸合同。
借款人向貸款銀行申請(qǐng)個(gè)人住房貸款的， 貸款銀行審核同意后會(huì)與借款人簽訂個(gè)人住房貸款合同， 由于個(gè)人信用制度不健全， 銀行為了保證債權(quán)的實(shí)現(xiàn)， 還會(huì)要求簽訂房屋抵押合同， 而為了進(jìn)一步確保抵押物的安全， 又要求借款人將抵押房屋投保財(cái)產(chǎn)保險(xiǎn)。
2、借款人與保險(xiǎn)公司之間是保險(xiǎn)關(guān)系， 法律關(guān)系的基礎(chǔ)是保險(xiǎn)合同。
如前所述， 借款人根據(jù)貸款銀行的要求， 向保險(xiǎn)公司投保抵押住房保險(xiǎn)， 兩者形成一個(gè)保險(xiǎn)合同的關(guān)系。從客觀情況來看， 抵押住房保險(xiǎn)合同與抵押貸款合同中對(duì)抵押房屋保險(xiǎn)的要求息息相關(guān)， 但從法律的角度來看， 兩者是相對(duì)獨(dú)立的， 并非主合同與從合同的關(guān)系。
3、貸款銀行與保險(xiǎn)公司之間是關(guān)系， 法律關(guān)系的基礎(chǔ)是保險(xiǎn)兼業(yè)協(xié)議。
為簡(jiǎn)化手續(xù)， 保險(xiǎn)公司通常委托銀行抵押房屋保險(xiǎn)業(yè)務(wù)，并支付一定比例的傭金， 由此雙方便產(chǎn)生了兼業(yè)關(guān)系。此外， 銀行作為保險(xiǎn)合同的受益人， 又成了保險(xiǎn)合同中的關(guān)系人， 享有一定的權(quán)利和義務(wù)。根據(jù)借款人與保險(xiǎn)公司之間的約定， 貸款銀行作為保險(xiǎn)合同的第一受益人， 可以在發(fā)生保險(xiǎn)事故時(shí)向保險(xiǎn)公司提出就保險(xiǎn)賠款優(yōu)先受償?shù)囊?。除此以外?貸款銀行與保險(xiǎn)公司之間并無直接的法律關(guān)系。
二、投保抵押住房保險(xiǎn)是否為購(gòu)房借款人的必須合同義務(wù)
想必對(duì)于貸款銀行要求購(gòu)房借款人為抵押住房辦理保險(xiǎn)，有些人對(duì)此不理解，認(rèn)為這違反了《保險(xiǎn)法》關(guān)于不得強(qiáng)制保險(xiǎn)的規(guī)定，對(duì)銀行和保險(xiǎn)公司提出異議。對(duì)此，有些銀行或保險(xiǎn)公司簡(jiǎn)單地解釋為，是執(zhí)行中國(guó)人民銀行《個(gè)人住房貸款管理辦法》的規(guī)定。
的確，中國(guó)人民銀行在《個(gè)人住房貸款管理辦法》1中規(guī)定了購(gòu)房借款人抵押住房時(shí)應(yīng)辦理保險(xiǎn)，但中國(guó)人民銀行這一管理辦法在法律性質(zhì)上屬于部門行政規(guī)章，不屬于人大制定的法律或國(guó)務(wù)院制定的行政法規(guī)，不能滿足保險(xiǎn)法規(guī)定的只有法律或行政法規(guī)才能規(guī)定強(qiáng)制保險(xiǎn)的條件，因此這一解釋在法律上是不具有說服力的。
然而實(shí)際上，購(gòu)房借款人辦理保險(xiǎn)不是銀行單方強(qiáng)制行為，而是購(gòu)房借款人與貸款銀行自愿訂立的貸款合同約定的借款人義務(wù)。
購(gòu)房人在積蓄不足的情況下，希望提前購(gòu)房消費(fèi)，為實(shí)現(xiàn)這一目的，購(gòu)房人選擇向銀行申請(qǐng)貸款。在購(gòu)房人與銀行協(xié)商訂立貸款合同時(shí)，銀行為了保證自身債權(quán)的實(shí)現(xiàn)，即確保發(fā)放的貸款能安全收回，依據(jù)擔(dān)保法要求購(gòu)房借款人提供擔(dān)保作為發(fā)放貸款的條件之一。擔(dān)?？梢圆扇”ＷC、質(zhì)押或抵押等不同方式。例如，由房屋置業(yè)擔(dān)保公司為購(gòu)房借款人提供保證；或由購(gòu)房借款人將定期存單、債券等有價(jià)證券質(zhì)押給銀行；或由購(gòu)房借款人將購(gòu)得的住房抵押給銀行等。具體采用何種擔(dān)保方式可由借款人根據(jù)自身情況與貸款銀行協(xié)商確定。在雙方選擇了以抵押方式提供擔(dān)保后，銀行作為抵押權(quán)人根據(jù)擔(dān)保法可以要求抵押人即購(gòu)房借款人采取適當(dāng)措施保全用于抵押的住房的價(jià)值，抵押住房保險(xiǎn)便是一種有效可行的保全住房?jī)r(jià)值的方式。因此，雙方在貸款合同中就約定了由購(gòu)房借款人投保抵押住房保險(xiǎn)。投保抵押住房保險(xiǎn)與返還本金、支付利息、提供抵押一樣，都是借款人的合同義務(wù)。借款人在享受從銀行獲得貸款權(quán)利的同時(shí)承擔(dān)相應(yīng)義務(wù)是等價(jià)有償?shù)墓浇灰仔袨椋耆厦袷路梢蟮墓阶栽冈瓌t。抵押住房保險(xiǎn)是使購(gòu)房借款人、銀行、保險(xiǎn)公司和房產(chǎn)商都能從中獲利的多贏機(jī)制，理應(yīng)得到包括購(gòu)房借款人在內(nèi)的各方歡迎和支持。
需要提醒的是，銀行可以要求購(gòu)房借款人投保抵押住房保險(xiǎn)，但不能規(guī)定購(gòu)房借款人必須向其指定的保險(xiǎn)公司投保，銀行指定保險(xiǎn)公司投保剝奪了借款人的選擇權(quán)，限制了保險(xiǎn)公司之間的公平競(jìng)爭(zhēng)，違反法律關(guān)于反不正當(dāng)競(jìng)爭(zhēng)的規(guī)定，購(gòu)房借款人有權(quán)拒絕。由于此類行為曾受到處罰， 目前由于這種原因引起的糾紛已不多見。
三、如果抵押住房在交付購(gòu)房人之前發(fā)生保險(xiǎn)事故的，保險(xiǎn)公司是否應(yīng)當(dāng)賠償
保險(xiǎn)公司何時(shí)開始承擔(dān)保險(xiǎn)責(zé)任，由保險(xiǎn)條款規(guī)定或保險(xiǎn)公司與投保人即購(gòu)房貸款人雙方約定。
但有專業(yè)人士對(duì)保險(xiǎn)生效日的規(guī)定存有異議，指出對(duì)于還貸保證保險(xiǎn)，保險(xiǎn)期限自貸款合同生效時(shí)開始是可以的，但對(duì)于財(cái)產(chǎn)損失保險(xiǎn)，作同樣的規(guī)定就不合適了。因?yàn)閺馁J款合同生效銀行向房產(chǎn)商劃付貸款到房產(chǎn)商向購(gòu)房人交付房屋或登記產(chǎn)權(quán)之間有一段間隔期間，如果是購(gòu)買期房，這段期間會(huì)間隔得更長(zhǎng)。在這期間由于未辦理產(chǎn)權(quán)登記，購(gòu)房人對(duì)房屋不具有所有權(quán)，房產(chǎn)商未向購(gòu)房人交付房屋前，購(gòu)房人依合同法也無須承擔(dān)房屋毀損滅失的風(fēng)險(xiǎn)，因而購(gòu)房人對(duì)房屋不具有法律上承認(rèn)的利益，不符合保險(xiǎn)法規(guī)定的投保人應(yīng)對(duì)保險(xiǎn)標(biāo)的具有保險(xiǎn)利益的要求，使得保險(xiǎn)合同中的財(cái)產(chǎn)損失保險(xiǎn)在此期間無效，即抵押住房在交付購(gòu)房人之前發(fā)生保險(xiǎn)事故的，保險(xiǎn)公司不負(fù)責(zé)賠償。
這種觀點(diǎn)有一定的道理，但忽視了一個(gè)重要事實(shí)，即購(gòu)房人在辦理貸款手續(xù)和保險(xiǎn)手續(xù)之前，已與房產(chǎn)商訂立了房屋買賣合同，購(gòu)房人在自付了首付款和通過銀行支付了約定房款后，依購(gòu)房合同其對(duì)房產(chǎn)商就享有了債權(quán)，債權(quán)的內(nèi)容為房產(chǎn)商須按合同約定向購(gòu)房人交付約定的房屋。如果抵押房屋在交付購(gòu)房人之前發(fā)生毀損滅失，將直接造成對(duì)購(gòu)房人債權(quán)的損害，所以在抵押住房交付購(gòu)房人之前購(gòu)房人對(duì)該房屋具有保險(xiǎn)利益，購(gòu)房人是否占有該房屋并不影響保險(xiǎn)合同的效力。即使房產(chǎn)商還未交房，如抵押房屋發(fā)生保險(xiǎn)事故造成損失時(shí)，購(gòu)房借款人也可以請(qǐng)求保險(xiǎn)公司賠償損失。
因此，抵押住房在交付購(gòu)房人之前發(fā)生保險(xiǎn)事故的，保險(xiǎn)公司應(yīng)當(dāng)賠償。
總之，穩(wěn)定完善的抵押住房貸款保險(xiǎn)體系在房地產(chǎn)保險(xiǎn)的發(fā)展中具有不容忽視的作用。以美國(guó)為例，其實(shí)行的是非營(yíng)利性的政府機(jī)構(gòu)和私營(yíng)商業(yè)保險(xiǎn)公司共同構(gòu)成的住房抵押貸款保險(xiǎn)體系。這種政策性和商業(yè)性保險(xiǎn)相結(jié)合，共同分擔(dān)風(fēng)險(xiǎn)的模式，使其有效地應(yīng)對(duì)住房抵押貸款中可能存在的風(fēng)險(xiǎn)。
目前，住房抵押貸款保險(xiǎn)體系在我國(guó)有一定的基石，如保險(xiǎn)法和房地產(chǎn)法中相關(guān)的規(guī)定，但因?yàn)槠渫怀龅闹匾匚欢枨蟮膶ｉT的調(diào)制規(guī)范還沒有建立，因此一直沒有得到完善。我國(guó)政府應(yīng)在完善政策法規(guī)加強(qiáng)監(jiān)督力度和設(shè)置政策性保險(xiǎn)機(jī)構(gòu)等方面深入?yún)⑴c到房地產(chǎn)保險(xiǎn)市場(chǎng)中?？梢曰诂F(xiàn)行部門規(guī)章及各地政府管理辦法中存在的缺陷，建立與完善房地產(chǎn)保險(xiǎn)相關(guān)政策法規(guī)；可以為保障房地產(chǎn)保險(xiǎn)市場(chǎng)的有序發(fā)展，保險(xiǎn)監(jiān)管部門應(yīng)加大監(jiān)管力度；可以探索設(shè)立政策性房地產(chǎn)保險(xiǎn)機(jī)構(gòu)，房地產(chǎn)保險(xiǎn)機(jī)構(gòu)的設(shè)置是否恰當(dāng)合理，關(guān)系到我國(guó)房地產(chǎn)市場(chǎng)的持續(xù)正常發(fā)展。
【關(guān)鍵詞】 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；軟骨細(xì)胞；共同培養(yǎng)技術(shù)；脫鈣骨基質(zhì)；關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)
Fullthickness articular cartilage defect repairment by coculture of autogenic bone marrowderived mesenchymal stem cells with chondrocytes and implantation into allogenic demineralized bone matrix in rabbits
【Abstract】 AIM: To investigate the feasibility of articular cartilage defect repairment by coculture of autogenic bone marrowderived mesenchymal stem cells(BMSCs) with chondrocytetes and implantation into allogenic demineralized bone matrix(DBM)， evaluate the outcomes of repairment in order to provide a theoretical basis for optimizing cell resources for seeding. METHODS: Twopassaged BMSCs and chondrocytes were collected both at a concentration of 5×109/L and then cocultured at 2∶1. Articular cartilage defects in the knee joints of rabbits repaired by the cocultured cells seeded into allogenic DBM served as experimental group A， by simple DBM as control group B and by nothing as control group C. Repaired tissues were evaluated with macroscopic observation，histological scores and immunohistochemical staining at week 8 and 16 after transplantation. RESULTS: Chondrocytes cocultured became rich in extracellular matrix and proliferated promptly. The ratio of chondrocytes to BMSCs achieved above 1∶1 at 5-7 d after coculture.In the experimental group A repaired tissues represented hyaline，smooth and flat. Chondrocytes in the zones of integrating with peripheral native cartilages were more mature. In the control group B and C， repaired tissues were fibers.Histological scores indicated that experimental group A excelled group B and C， and the differences were statistically significant(P0.05). Immunohistochemical staining showed that cells in the zones of repaired tissues were larger in size， arranged columnnedly， rich in typeⅡcollagen matrix and integrated satisfactorily with native adjacent cartilages and subchondral bones in the experimental group A at week 16 postoperatively. CONCLUSION: Coculture of autogenic BMSCs with chondrocytes can promote the proliferation of chondrocytes and the production of chondral matrix. Cocultured cells for seeding can save a number of chondrocytes， shorten culture periods and reduce subculture times. Cocultured cells embedded into DBM can repair articular cartilage defects effectively.
【Keywords】 bone marrowderived mesenchymal stem cells; chondrocytes; coculture techniques; demineralized bone matrix; articular cartilage repair
【摘要】 目的： 探討自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)與軟骨細(xì)胞共培養(yǎng)復(fù)合同種異體脫鈣骨基質(zhì)（DBM）修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損的可行性，評(píng)價(jià)修復(fù)效果，為優(yōu)化種子細(xì)胞源提供依據(jù). 方法： 取濃度為5×109/L的第二代BMSCs和軟骨細(xì)胞，按2∶1比例混勻共培養(yǎng)作為種子細(xì)胞. DBM與共培養(yǎng)細(xì)胞復(fù)合植入修復(fù)為實(shí)驗(yàn)組（A組），單純材料DBM組（B組）和不處理組（C組）作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組. 移植8和16 wk后經(jīng)大體觀察、組織學(xué)評(píng)分和免疫組化染色評(píng)價(jià)缺損修復(fù). 結(jié)果： 共培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞基質(zhì)合成豐富，細(xì)胞增殖快，共培養(yǎng)5～7 d兩種細(xì)胞比例達(dá)1∶1以上. A組缺損修復(fù)組織呈軟骨樣，表面光滑平坦，與周圍軟骨整合的軟骨細(xì)胞更為成熟. B組和C組的修復(fù)組織呈纖維組織. 組織學(xué)評(píng)分表明A組優(yōu)于B， C兩組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）. 免疫組化染色顯示A組修復(fù)組織的細(xì)胞為透明軟骨樣細(xì)胞，柱狀排列，Ⅱ型膠原染色陽性，與周圍軟骨及軟骨下骨整合良好. 結(jié)論： 自體BMSCs與軟骨細(xì)胞共培養(yǎng)，BMSCs能增強(qiáng)軟骨細(xì)胞的增殖，促進(jìn)軟骨細(xì)胞基質(zhì)合成，縮短軟骨細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間和減少傳代次數(shù)，可節(jié)省大量的軟骨細(xì)胞，與DBM復(fù)合后能有效修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損.
【關(guān)鍵詞】 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；軟骨細(xì)胞；共同培養(yǎng)技術(shù)；脫鈣骨基質(zhì)；關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)
0引言
關(guān)節(jié)軟骨缺損自身不能有效修復(fù)，組織工程技術(shù)為解決這一難題提供了新的思路. 但由于軟骨細(xì)胞來源不足嚴(yán)重制約了其應(yīng)用［1］. 以自體軟骨細(xì)胞作為種子細(xì)胞，取材部位受限，軟骨細(xì)胞培養(yǎng)增殖能力低，傳代培養(yǎng)容易引起老化和去分化［2］，而成體骨髓中骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells， BMSCs）含量少，隨傳代次數(shù)的增多，成軟骨潛能明顯降低， Rubio等［3］研究證實(shí)BMSCs多次傳代培養(yǎng)有致瘤傾向. 我們應(yīng)用自體BMSCs和軟骨細(xì)胞共培養(yǎng)復(fù)合同種異體脫鈣骨基質(zhì)（demineralized bone matrix， DBM）修復(fù)兔膝關(guān)節(jié)軟骨全層缺損，并對(duì)修復(fù)組織進(jìn)行評(píng)價(jià)，為優(yōu)化種子細(xì)胞源提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).
1材料和方法
1.1材料DMEM培養(yǎng)基（美國(guó)Gibco公司）；胎牛血清（FBS）（杭州四季青生物公司）；CO2孵育箱（恒溫培養(yǎng)箱，日本Sony公司）；膠原酶（美國(guó)Sigma公司）；相差顯微鏡（日本BH2型Olympus顯微鏡）；Ⅱ型膠原免疫試劑盒（武漢博士德生物公司）；青紫蘭兔（衛(wèi)生部蘭州生物制品研究所提供）.
1.2方法
1.2.1BMSCs與軟骨細(xì)胞共培養(yǎng)取本研究所實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的第二代自體BMSCs，濃度為5×109/L的懸浮液1 mL和相同濃度的軟骨細(xì)胞懸液0.5 mL （2∶1）混勻，用含150 mL/L FBS的DMEM培養(yǎng)基在37℃飽和濕度條件下的CO2孵育箱中進(jìn)行共培養(yǎng)，待細(xì)胞匯合至單層用2.5 g/L胰酶消化與同種異體DBM復(fù)合.
1.2.2同種異體DBM的制備處死同種青紫藍(lán)兔，取四肢骨干骺端及椎體松質(zhì)骨，剔除附著的肌肉及骨膜，-80℃冰柜中凍存72 h，參照文獻(xiàn)［4］的方法進(jìn)行脫鈣后，再將骨塊置于乙醚和乙醇中脫脂各24 h，用無菌蒸餾水反復(fù)沖洗浸泡至中性，自然干燥后環(huán)氧乙烷消毒，4℃保存?zhèn)溆?
1.2.3動(dòng)物模型與實(shí)驗(yàn)分組3～6個(gè)月齡的青紫蘭兔54只，體質(zhì)量1.0～1.5 kg，雌雄不限. 取膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)弧形切口，向外翻開髕骨暴露膝關(guān)節(jié)，于股骨滑車關(guān)節(jié)面上用φ4 mm鉆頭鉆孔，深度約3～4 mm穿透軟骨下骨，有阻力感見新鮮血液溢出，造成全層關(guān)節(jié)軟骨缺損模型. 將動(dòng)物隨機(jī)分為A， B， C三個(gè)處理組，每組18只. A組于軟骨缺損處植入共培養(yǎng)細(xì)胞DBM（細(xì)胞均為自體細(xì)胞）；B組單純植入DBM；C組不作任何植入.
1.2.4指標(biāo)觀察相差顯微鏡下觀察共培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)和增殖，并對(duì)共培養(yǎng)細(xì)胞爬片進(jìn)行番紅0染色. 每組移植術(shù)后8和16 wk分別處死9只動(dòng)物，取出膝關(guān)節(jié)對(duì)修復(fù)組織分別進(jìn)行大體、組織學(xué)和免疫組織化學(xué)觀測(cè). 參照文獻(xiàn)［5］的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)術(shù)后8和16 wk各組動(dòng)物分別進(jìn)行組織學(xué)評(píng)分
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理： 應(yīng)用SPSS10.0軟件包對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，各組間差異采用單因素方差分析，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.
2結(jié)果
2.1共培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察共培養(yǎng)細(xì)胞24 h后逐漸貼壁，軟骨細(xì)胞呈橢圓形或三角形，大部分居混合細(xì)胞的中央，表面光滑，細(xì)胞體積變大，胞質(zhì)增多，細(xì)胞數(shù)量多增殖旺盛，細(xì)胞外基質(zhì)合成豐富被番紅0均勻染色;BMSCs細(xì)胞體積無明顯增大，散在于共培養(yǎng)細(xì)胞中，表面呈成纖維細(xì)胞樣染色陰性，所占比例逐漸降低. 共培養(yǎng)5～7 d，軟骨細(xì)胞與BMSCs比例達(dá)1∶1以上（圖1）.
圖1BMSCs和軟骨細(xì)胞共培養(yǎng)番紅0染色×200(藍(lán)色箭頭示軟骨細(xì)胞，紅色箭頭示BMSCs)（略）
2.2大體標(biāo)本觀察術(shù)后所有動(dòng)物切口愈合良好，關(guān)節(jié)液清亮，關(guān)節(jié)腔無粘連、滑膜增生、關(guān)節(jié)游離體及骨贅形成. A組： 術(shù)后8 wk缺損已由半透明、淡紅色組織填充，邊界模糊，表面光滑；16 wk與周圍軟骨色澤相近，表面平整（圖2）. B組： 術(shù)后8 wk缺損區(qū)修復(fù)組織為乳白色，表面不光整，部分仍呈空洞；16 wk為纖維性修復(fù). C組：術(shù)后8 wk缺損區(qū)為纖維樣組織覆蓋，色澤暗灰；16 wk周圍軟骨呈蟲蝕樣改變.
2.3組織學(xué)觀察A組： 術(shù)后8 wk修復(fù)組織細(xì)胞較多，以圓形透明軟骨樣細(xì)胞為主，有軟骨陷窩，表層有梭形成纖維樣細(xì)胞，與周圍軟骨結(jié)合，基底部較多新生骨形成；16 wk修復(fù)組織為透明軟骨樣，厚度接近正常，與周圍軟骨結(jié)合好，深層軟骨鈣化，與底層骨結(jié)合緊密，基質(zhì)著色正常，未見DBM殘留（圖3）. B組： 術(shù)后8 wk缺損組織細(xì)胞較少，細(xì)胞層次排列差；16 wk修復(fù)組織菲薄，呈纖維樣，與周圍軟骨未結(jié)合，基底部有少量新生骨形成. C組： 術(shù)后8 wk缺損組織有薄層纖維組織覆蓋；16 wk缺損區(qū)纖維組織進(jìn)一步增厚，與周圍軟骨未結(jié)合. 術(shù)后8和16 wk A組評(píng)分均優(yōu)于B， C組（P0.05）.
圖2共培養(yǎng)細(xì)胞DBM修復(fù)關(guān)節(jié)缺損的大體觀察(箭頭示修復(fù)部位)（略）
圖3共培養(yǎng)細(xì)胞DBM組修復(fù)關(guān)節(jié)缺損的組織學(xué)觀察甲苯胺蘭染色×200(箭頭示修復(fù)組織)（略）
2.4免疫組織化學(xué)術(shù)后16 wk時(shí)A組修復(fù)組織中細(xì)胞呈圓形或橢圓形，形體大柱狀排列，與周圍軟骨及軟骨下骨整合良好，細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外間質(zhì)中Ⅱ型膠原染色陽性，出現(xiàn)棕黃色顆粒（圖4）；B組和C組修復(fù)組織未出現(xiàn)黃染的陽性區(qū)域.
圖4免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)共培養(yǎng)細(xì)胞DBM組修復(fù)組織的Ⅱ型膠原DAB染色×100(箭頭示修復(fù)組織)（略）
3討論
關(guān)節(jié)軟骨組織代謝活性較低，創(chuàng)傷和手術(shù)等所致的軟骨損傷或缺損難以自我修復(fù)或以纖維組織填充替代，影響關(guān)節(jié)功能的恢復(fù). 細(xì)胞生物學(xué)和生物材料技術(shù)的發(fā)展，應(yīng)用組織工程技術(shù)修復(fù)軟骨缺損成為可能，但是至今尚無一種細(xì)胞能完全滿足軟骨組織工程對(duì)種子細(xì)胞的要求［6］. Tsuchiya等［7］用人BMSCs與牛軟骨細(xì)胞按不同比例混合進(jìn)行共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)軟骨細(xì)胞的增殖速度和細(xì)胞外基質(zhì)的合成與BMSCs的比例呈正相關(guān). 我們通過BMSCs與軟骨細(xì)胞體外共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，共培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞比單獨(dú)培養(yǎng)的同代軟骨細(xì)胞體積大，增殖速度加快，有大量成熟的軟骨陷窩形成和基質(zhì)合成，說明BMSCs能促進(jìn)軟骨細(xì)胞的增殖和表型維持，因此，共培養(yǎng)使軟骨細(xì)胞快速增殖，這就節(jié)省了軟骨細(xì)胞的用量，避免了為獲取足夠量的軟骨細(xì)胞反復(fù)傳代培養(yǎng)而引起的軟骨細(xì)胞老化和去分化［2］. 而BMSCs體積變化不明顯或輕度縮小，并且連續(xù)培養(yǎng)后兩種細(xì)胞的比例仍可保持在2∶1左右，說明軟骨細(xì)胞和BMSCs的增殖速度相接近，這與Tsuchiya等［7］的結(jié)果相似，這是否由軟骨細(xì)胞將BMSCs誘導(dǎo)成或?qū)⒎只癁檐浌羌?xì)胞并合成細(xì)胞外基質(zhì)，尚需進(jìn)行深入研究.
單獨(dú)BMSCs在非軟骨環(huán)境下并不能構(gòu)建出軟骨組織，而用20%以上的少量軟骨細(xì)胞與BMSCs共培養(yǎng)可構(gòu)建出成熟的工程化軟骨，并且在軟骨濕重、糖胺多糖含量和軟骨特異性基質(zhì)表達(dá)等方面都優(yōu)于相同數(shù)量的軟骨細(xì)胞構(gòu)建的軟骨，比用單獨(dú)軟骨細(xì)胞構(gòu)建軟骨組織可減少60%～80%的軟骨細(xì)胞量，為解決軟骨細(xì)胞來源不足提供了切實(shí)可行的途徑［8］. 研究表明BMSCs和軟骨細(xì)胞共培養(yǎng)期間TGFβ3， BMP2， IGF1和FGF2等生長(zhǎng)因子表達(dá)增加5.4～11.6倍不等，增強(qiáng)的活性因子介導(dǎo)軟骨細(xì)胞旁分泌或自分泌，可能是促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖和表型維持的主要因素之一，Goldberg等［9］應(yīng)用含血清和TGFβ的培養(yǎng)基分別培養(yǎng)軟骨細(xì)胞進(jìn)行比較，結(jié)果也顯示TGFβ能使去分化的軟骨細(xì)胞重新分化和表型的維持，但具體的信號(hào)傳導(dǎo)及其途徑尚不清楚［10-12］.
我們應(yīng)用BMSCs和軟骨細(xì)胞共培養(yǎng)與DBM復(fù)合移植修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損，修復(fù)組織內(nèi)細(xì)胞形態(tài)類似于透明軟骨細(xì)胞，細(xì)胞周圍有軟骨陷窩形成，免疫組化結(jié)果顯示為Ⅱ型膠原纖維，證實(shí)了修復(fù)組織為透明樣軟骨. 共培養(yǎng)復(fù)合物中的BMSCs直接分化為骨細(xì)胞直接與周圍的軟骨下骨進(jìn)行骨與骨的整合，比單獨(dú)培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞與軟骨下骨結(jié)合更加牢固，但修復(fù)組織與周圍正常軟骨仍有差別，主要表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)量多且排列紊亂，術(shù)后16 wk細(xì)胞數(shù)量減少并出現(xiàn)了柱狀排列趨勢(shì)，更接近于正常軟骨組織，可能是術(shù)后不限制關(guān)節(jié)活動(dòng)，修復(fù)組織在局部應(yīng)力作用下發(fā)生改建所致［13］. B組軟骨缺損基底部也有新骨形成，是由于載體材料的存在使髓腔或松質(zhì)骨中的MSCs駐留在損傷區(qū)底部，進(jìn)而分化成少量骨組織［14］.
我們應(yīng)用的同種異體DBM是經(jīng)冷凍、脫脂、脫鈣、去蛋白處理得到的產(chǎn)物，抗原性消除或大大降低，且保留了誘導(dǎo)軟骨形成的生長(zhǎng)因子和膠原等基質(zhì)，有利于細(xì)胞增殖和分化. DBM為多孔海綿樣結(jié)構(gòu)，可提供寬大空間容納大量的種子細(xì)胞，利于細(xì)胞黏附、細(xì)胞外基質(zhì)沉淀、營(yíng)養(yǎng)和氧氣的進(jìn)入以及代謝產(chǎn)物的排出. DBM植入缺損部位后第四周開始吸收，完全吸收需8～12 wk，而軟骨形成需6～8 wk，因此DBM吸收和軟骨形成幾乎同步. 根據(jù)修復(fù)部位的不同可調(diào)整脫鈣時(shí)間，或部分脫鈣和表面脫鈣，能適應(yīng)不同部位的生物力學(xué)強(qiáng)度要求. 按修復(fù)缺損的形狀可剪成不同的形狀和大小，應(yīng)用方便. 同種異體DBM制備方法相對(duì)簡(jiǎn)便可大量獲取，低溫下可長(zhǎng)期保存建立DBM骨庫備用. 因此，DBM是一種理想的軟骨組織工程支架材料［4，15］.
BMSCs和軟骨細(xì)胞共培養(yǎng)，兩種細(xì)胞相互促進(jìn)增殖和分化，作為種子細(xì)胞可減少軟骨細(xì)胞增殖傳代次數(shù)并節(jié)省軟骨細(xì)胞數(shù)量，與DMB復(fù)合能有效修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損，為優(yōu)化種子細(xì)胞源提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，但是共培養(yǎng)的兩種細(xì)胞間相互作用的機(jī)制及其調(diào)節(jié)機(jī)制尚不清楚，并且本實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物模型是在正常關(guān)節(jié)面上造成缺損區(qū)進(jìn)行的修復(fù)，有別于臨床上常見的大面積不規(guī)則缺損，因此對(duì)這些問題需要進(jìn)一步研究和改進(jìn).
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[關(guān)鍵詞]祁州漏蘆；H2O2；氧化應(yīng)激；凋亡；HepG2
[Abstract]To study the inhibitory effect of Rhaponticum uniflorum on apoptosis induced by H2O2 in HepG2 cells Human HepG2 cells injury models were established by H2O2， then cell survival rate was assayed by MTT method； levels of LDH， ALT， and AST were detected by chemical colorimetric method；SOD activity was detected by xanthine oxidase method； GSH content was detected by dithiobisnitrobenzoic acid（DTNB）； MDA level was detected by thiobarbituric acid （TBA） method；and the relative activities of Caspase3， 8 and 9 were measured by Colorimetry The expression levels of Cleaved Caspase3（Casp3）， cytochrome（Cyto c）， NFκB， ERK， JNK， p38 MAPK， as well as the phospharylated proteins were determined with Western blotting method The results showed that R unifloru had no significant effect on cell viabilities of HepG2 cells at the concentrations of 25400 mg?L-1 However， H2O2decreased the cell viabilities， increased the cellular oxidative stress， and upregulated the protein expressions of Casp3， cytoplasmic Cyto c， pJNK and nuclear NFκB As compared with the model group，R unifloru could increase the cell viability， reduce LDH， ALT and AST leakage， reduce the MDA formation， increase the SOD and GSH levels，reduce the relative activities of Caspase3， 8 and 9， downregulated the protein expressions of Casp3 and cytoplasmic Cyto c， and downregulate the pJNK and nuclear NFκB levelsThe results indicated that R unifloru had the inhibitory effect on apoptosis induced by H2O2in HepG2 cells， and the mechanism maybe associated with inhibiting JNK activation and NFκB nuclear translocation
[Key words]Rhaponticum unifloru； H2O2； oxidative stress； apoptosis； HepG2
近年碭尾》⑸率的逐年上升已經(jīng)引起社會(huì)的關(guān)注，而活性氧引發(fā)的肝細(xì)胞氧化應(yīng)激是多種肝病發(fā)生的重要機(jī)制之一，因此，探討如何有效緩解氧化應(yīng)激損傷對(duì)肝病的防治具有重要意義[1]。祁州漏蘆是菊科植物Rhaponticum uniflorum （L） DC的干燥根，是一味常用中藥。廣泛分布于我國(guó)內(nèi)蒙古、東北、山東等地區(qū)，藥源豐富。它性味咸、苦、寒，能清熱解毒，消腫排毒，通乳汁；主治于乳汁不通、淋巴結(jié)結(jié)核、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、痔瘡等[23]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，祁州漏蘆具有提高機(jī)體免疫、抗動(dòng)脈硬化、抗脂質(zhì)過氧化、抗衰老、抗炎等作用[46]。課題組研究還發(fā)現(xiàn)，祁州漏蘆具有良好的保肝作用，能預(yù)防多種因素引起的肝損傷，如，可抑制四氯化碳、氨基半乳糖所致化學(xué)性肝損傷以及對(duì)乙酰氨基酚所致藥物性肝損傷等[79]。本實(shí)驗(yàn)通過建立H2O2致HepG2細(xì)胞損傷模型，預(yù)防性給藥后觀察祁州漏蘆水提物對(duì)氧化損傷所致凋亡以及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的變化，以便探討祁州漏蘆肝細(xì)胞損傷的保護(hù)作用機(jī)制，為祁州漏蘆的保肝作用研究提供參考。
1材料
11藥物與試劑將祁州漏蘆切碎后加水煎煮，濾液經(jīng)減壓蒸餾即得祁州漏蘆提取物（RU）干品，主要成分為多糖（81%）和甾酮（12%）[6]；用無血清培養(yǎng)液配成所需濃度，過濾除雜除菌備用。人HepG2肝癌細(xì)胞購(gòu)自南京凱基生物有限公司。DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清購(gòu)自Gibco公司；MTT購(gòu)自SigmaAldrich公司； LDH，ALT，AST，MDA，GSH，SOD試劑盒購(gòu)自南京建成科技有限公司；Caspase3，8，9檢測(cè)試劑盒、線粒體/細(xì)胞核制備試劑盒購(gòu)自江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司；兔NFκB p65多克隆抗體、兔pNFκB p65多克隆抗體、小鼠ERK多克隆抗體、兔pERK多克隆抗體、兔JNK多克隆抗體、兔pJNK多克隆抗體、兔p38多克隆抗體、兔pp38 MAPK多克隆抗體購(gòu)自Abcam公司；兔Cleaved Caspase3（Casp3）單克隆抗體、兔細(xì)胞色素c（Cyto c）單克隆抗體購(gòu)自Cell Signaling公司。
12儀器二氧化碳培養(yǎng)箱（美國(guó)Shellab公司）；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf公司）；酶標(biāo)儀（深圳雷杜公司）；垂直版電泳儀及轉(zhuǎn)印槽（美國(guó)BioRad公司）；凝膠成像分析儀（美國(guó)UVP公司）。
2方法
21細(xì)胞培養(yǎng)及傳代細(xì)胞培養(yǎng)和傳代按常規(guī)方法進(jìn)行，含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基，37 ℃，5%CO2的飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用025%胰蛋白酶溶液消化進(jìn)行傳代[10]。
22RU試驗(yàn)劑量的確定細(xì)胞接種于96孔板中培養(yǎng)12 h后，正常組換成無血清培養(yǎng)液；其余6組為藥物組，加RU溶液使其質(zhì)量濃度分別為25，50，100，200，400，800 mg?L-1。繼續(xù)培養(yǎng)24 h，吸出培養(yǎng)液，加入MTT溶液，MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率。另設(shè)空白孔（只加RU溶液）以排除藥物干擾[10]。以細(xì)胞存活率（100±5）%為標(biāo)準(zhǔn)確定RU安全濃度[1011]。細(xì)胞存活率=（實(shí)驗(yàn)組-空白組）/（正常組-空白組）×100%。
23細(xì)胞損傷模型的建立和細(xì)胞存活率的檢測(cè)細(xì)胞接種于96孔板，培養(yǎng)12 h細(xì)胞全部貼壁后，分為正常組、模型M及RU高、中、低劑量組（分別為RU 200，RU 100和RU 50組，質(zhì)量濃度分別為200，100，50 mg?L-1）。RU組加入相應(yīng)的含藥培養(yǎng)液，孵育24 h；正常組和模型組加入無血清培養(yǎng)液繼續(xù)孵育24 h；除正常組外，其余組加入300 μmol?L-1 H2O2造模[12]。MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率。
24細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH，ALT，AST釋放的檢測(cè)細(xì)胞分組、造模和給藥按23項(xiàng)方法。按試劑盒說明書檢測(cè)培養(yǎng)液中LDH，ALT，AST的活性。
25細(xì)胞MDA，GSH生成和SOD活性的檢測(cè)按23項(xiàng)方法將細(xì)胞在6孔板中分組、造模和給藥。細(xì)胞用025%的胰酶消化，收集細(xì)胞并裂解，離心取上清。按照試劑盒說明書檢測(cè)細(xì)胞MDA，GSH水平和SOD活性。
26細(xì)胞Caspase3，8，9的相對(duì)活性的測(cè)定裂解細(xì)胞，離心取上清，并按照試劑盒說明書測(cè)定細(xì)胞Caspase3，8，9的相對(duì)活性。
27細(xì)胞Casp3，Cyto c，NFκB，ERK，JNK，p38蛋白及其磷酸化蛋白水平的檢測(cè)收集和裂解細(xì)胞，并提取細(xì)胞總蛋白。每組以20 μg蛋白進(jìn)行SDSPAGE電泳分離，轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。用脫脂奶粉封閉，加一抗孵育過夜，加HRP標(biāo)記二抗孵育1 h，加ECL試劑顯色，采集圖像并進(jìn)行灰度比值分析[67]。
28統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)以±s表示，采用SPSS 190統(tǒng)計(jì)軟件，采用單因素方差分析及t檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。
3結(jié)果
31RU對(duì)HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)的影響隨著RU濃度的升高，細(xì)胞存活率呈升高趨勢(shì)；質(zhì)量濃度介于50～400 mg?L-1時(shí)，HepG2細(xì)胞存活率為100%～105%，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)無顯著影響；當(dāng)質(zhì)量濃度為800 mg?L-1時(shí)，細(xì)胞存活率為107%，與正常組比較差異顯著（P
32RU對(duì)細(xì)胞存活率以及LDH，ALT，AST釋放的影響正常組的HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)良好，培養(yǎng)液中3種酶活性不高，說明正常組細(xì)胞沒有受到損傷；H2O2損傷后HepG2細(xì)胞存活率僅為正常組的54%，與正常組比較顯著降低（P
33RU對(duì)細(xì)胞MDA，GSH水平和SOD活性的影響與正常組比較，模型組細(xì)胞SOD活性和GSH含量顯著降低（P
34RU對(duì)Caspase3，8，9相對(duì)活性的影響與正常組比較，模型組細(xì)胞Caspase3，8，9的相對(duì)活性顯著增高（P
35RU對(duì)細(xì)胞Casp3 p17和胞漿Cyto c蛋白水平的影響蛋白印跡結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組細(xì)胞Casp3 p17和胞漿Cyto c蛋白水平顯著增高何鑫等：祁州漏蘆通過下調(diào)JNK和NFκB抑制H2O2致肝細(xì)胞凋亡
36RU對(duì)細(xì)胞MAPK磷酸化的影響H2O2不影響3種MAPK總蛋白水平，對(duì)p38磷酸化水平也無顯著影響，但上調(diào)ERK和JNK磷酸化水平（P
37RU對(duì)細(xì)胞NFκB磷酸化和核轉(zhuǎn)位的影響
4討論
在肝損傷發(fā)生發(fā)展過程中，氧化應(yīng)激是重要環(huán)節(jié)。因此，尋找對(duì)抗肝臟氧化應(yīng)激的藥物，可作為治療肝損傷關(guān)鍵途徑之一[11]。祁州漏蘆為傳統(tǒng)中藥，其保肝作用研究已有一定積累[79]。本試驗(yàn)以人HepG2肝癌細(xì)胞構(gòu)建H2O2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷模型，研究祁州漏蘆的抗肝細(xì)胞損傷作用，為闡明祁州漏蘆保肝機(jī)制提供參考。
當(dāng)肝細(xì)胞受到H2O2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷時(shí)，細(xì)胞存活率和細(xì)胞毒性是反映細(xì)胞受損程度的重要指標(biāo)。而LDH，ALT，AST作為肝細(xì)胞穩(wěn)定的胞內(nèi)酶，培養(yǎng)液中其活性升高是檢測(cè)肝細(xì)胞毒性的重要指標(biāo)之一[1113]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，祁州漏蘆干預(yù)可降低細(xì)胞毒性，提高細(xì)胞存活率，對(duì)H2O2誘導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用。
在H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷中，氧化應(yīng)激是重要損傷機(jī)制。肝細(xì)胞受損后產(chǎn)生的過量活性氧自由基，攻擊生物膜，引發(fā)脂質(zhì)過氧化，使過氧化物水平增高，因此MDA可以反映組織細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度[1113]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，祁州漏蘆干預(yù)可升高細(xì)胞SOD活性和GSH含量；降低細(xì)胞MDA生成，提示，祁州漏蘆可通過減輕H2O2誘導(dǎo)的肝細(xì)胞氧化應(yīng)激而達(dá)到抑制肝細(xì)胞損傷。
氧化應(yīng)激損傷同樣會(huì)誘導(dǎo)肝細(xì)胞發(fā)生凋亡。氧化應(yīng)激損傷中產(chǎn)生的過量活性氧會(huì)損傷功肝細(xì)胞線粒體，使其釋放Cyto c，繼而活化Caspase家族，并最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[14]。Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)是推動(dòng)細(xì)胞凋亡程序的核心事件，其中Caspase9為內(nèi)源性的線粒體凋亡途徑的關(guān)鍵酶，Caspase8為外源性的死亡受體途徑的關(guān)鍵酶，二者分別在細(xì)胞凋亡的2條主要途徑中起作用，而Caspase3則為凋亡的執(zhí)行者，是2條凋亡通路的共同環(huán)節(jié)，因此是凋亡發(fā)生的標(biāo)志酶[1314]。本研究顯示，H2O2上調(diào)Casp3和胞漿Cyto c蛋白表達(dá)，增高肝細(xì)胞Caspase3，8，9相對(duì)活性，而祁州漏蘆干預(yù)可下調(diào)Casp3和胞漿Cyto c蛋白表達(dá)，降低肝細(xì)胞Caspase3，8，9相對(duì)活性。提示，祁州漏蘆抑制H2O2誘導(dǎo)的肝細(xì)胞凋亡，至少與Cyto c釋放引起的線粒體途徑相關(guān)，死亡受體途徑的參與還需進(jìn)一步探討。
氧化應(yīng)激還可通過多個(gè)通路增強(qiáng)MAPK磷酸化而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡或乃闌因的激活或改變[15]。MAPK通路是細(xì)胞外信號(hào)到細(xì)胞內(nèi)的主要信號(hào)通路，ERK普遍認(rèn)為是“細(xì)胞生存”通路，JNK通路則形成調(diào)控細(xì)胞增殖和凋亡的一個(gè)復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)，存在協(xié)同和拮抗的現(xiàn)象，p38調(diào)控炎癥反應(yīng)，調(diào)節(jié)NFκB活化[16]。NFκB是一種具有多向轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用的蛋白因子，其與肝細(xì)胞損傷的關(guān)系一直是肝臟疾病研究中的熱點(diǎn)[17]。研究證實(shí)，活性氧可以直接激活NFκB轉(zhuǎn)移入細(xì)胞核，誘導(dǎo)靶基因的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)各種炎癥介質(zhì)釋放而導(dǎo)致肝細(xì)胞炎癥，誘發(fā)肝細(xì)胞凋亡[17]。本研究結(jié)果顯示，H2O2上調(diào)ERK，JNK和NFκB磷酸化以及NFκB核轉(zhuǎn)位水平，而祁州漏蘆干預(yù)可下調(diào)JNK磷酸化和NFκB核轉(zhuǎn)位水平，對(duì)ERK和NFκB磷酸化水平無顯著影響。提示，祁州漏蘆可能是通過抗JNK激活和NFκB核轉(zhuǎn)位作用而抑制肝細(xì)胞凋亡的。祁州漏蘆抗細(xì)胞凋亡作用中NFκB和JNK之間的關(guān)聯(lián)、以及線粒體凋亡通路之間的關(guān)系需進(jìn)一步研究。
綜上所述，祁州漏蘆對(duì)H2O2所致HepG2細(xì)胞凋亡具有抑制作用，其作用可能與其抗JNK激活和NFκB核轉(zhuǎn)位作用有關(guān)。
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