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單純皰疹病毒2型潛伏感染激活模型的建立及潛伏相關(guān)轉(zhuǎn)錄子開(kāi)放讀碼框架抑制后對(duì)潛伏相關(guān)轉(zhuǎn)錄子基因表達(dá)的影響

摘要:目的 研究單純皰疹病毒2型(HSV-2)潛伏感染激活中潛伏相關(guān)轉(zhuǎn)錄子(LAT)開(kāi)放讀碼框架(ORF)抑制后對(duì)LAT基因表達(dá)的影響。方法 建立HSV-2潛伏感染復(fù)發(fā)的神經(jīng)細(xì)胞(SHSY5Y)模型。運(yùn)用相差顯微鏡觀察HSV-2潛伏及激活后SH-SY5Y細(xì)胞形態(tài)的變化。對(duì)病毒在細(xì)胞中的潛伏及激發(fā)進(jìn)行PCR驗(yàn)證并測(cè)序。設(shè)計(jì)3對(duì)siRNA,激活誘導(dǎo)后轉(zhuǎn)染SH-SYSY細(xì)胞,相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化,RT-PCR半定量檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后LAT ORF表達(dá)的改變。結(jié)果在存在60 μmol/L阿昔洛韋(ACV)的環(huán)境,HSV-2在SH-SY5Y細(xì)胞中建立潛伏狀態(tài)。病毒在SH-SY5Y細(xì)胞中最長(zhǎng)可潛伏14d。43℃ 1.5 h誘導(dǎo)病毒潛伏激發(fā),而相差顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),病毒激發(fā)后細(xì)胞病變從24h到72 h,細(xì)胞變性、壞死的程度、數(shù)量隨感染時(shí)間延長(zhǎng)而增加。HSV-2 LAT、糖蛋白G(gG)基因PCR擴(kuò)增及電泳結(jié)果證實(shí)病毒在細(xì)胞中的潛伏及激活。LAT ORF-siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞后,LAT ORF mRNA的表達(dá)水平在轉(zhuǎn)染后24、36和48 h分別減少了39%、51%和60%。結(jié)論 抑制LAT ORF后能夠抑制HSV-2 LAT基因的表達(dá),為進(jìn)一步研究LAT ORF在病毒潛伏感染復(fù)發(fā)中的作用提供了依據(jù)。

關(guān)鍵詞:
  • 開(kāi)放讀碼框架  
  • 皰疹病毒2型  
  • rna干擾  
  • 潛伏相關(guān)轉(zhuǎn)錄子  
作者:
孫朝暉; 徐少珊; 危敏; 楊慧蘭
單位:
廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院檢驗(yàn)科; 510010; 廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院皮膚科; 510010; 廣州南方醫(yī)科大學(xué)基因工程研究所
刊名:
中華生物醫(yī)學(xué)工程

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期刊名稱(chēng):中華生物醫(yī)學(xué)工程

中華生物醫(yī)學(xué)工程雜志緊跟學(xué)術(shù)前沿,緊貼讀者,國(guó)內(nèi)刊號(hào)為:11-5668/R。堅(jiān)持指導(dǎo)性與實(shí)用性相結(jié)合的原則,創(chuàng)辦于1995年,雜志在全國(guó)同類(lèi)期刊中發(fā)行數(shù)量名列前茅。