摘要：目的探討小干擾RNA（siRNA）沉默大鼠軟骨細(xì)胞的CD44基因后對(duì)細(xì)胞CD44基因表達(dá)的抑制作用及對(duì)軟骨細(xì)胞在羧甲基殼聚糖（CMCS）作用下細(xì)胞生物學(xué)特性變化及其作用機(jī)制。方法構(gòu)建針對(duì)CD44基因特異性的siRNA（siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3），Lipofectamine“2000轉(zhuǎn)染軟骨細(xì)胞。通過免疫熒光鑒定cD44基因特異性siRNA（CD44-siRNA）的轉(zhuǎn)染情況，通過反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（FIT—PCR）及蛋白印跡法檢測(cè)CD44-siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞中CD44基因及蛋白的表達(dá)情況；通過硝普鈉誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞凋亡并通過流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)CMCS對(duì)硝普鈉誘導(dǎo)正常及經(jīng)CD44-siRNA轉(zhuǎn)染軟骨細(xì)胞凋亡的影響。采用單因素方差分析及SNK—q檢驗(yàn)對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果免疫熒光檢測(cè)發(fā)現(xiàn)CD44-siRNA成功轉(zhuǎn)染進(jìn)入軟骨細(xì)胞，轉(zhuǎn)染率在60％左右。RT—PCR檢測(cè)結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染siRNA-1后的24、48及72h，與空白對(duì)照組（0．429±0．053，0．501±0．037，0．341±0．009）相比，CD44的mRNA表達(dá)明顯減弱（分別為0．198±0．007，0．211±0．016，0．153±0．005；q=5．93，7．01，11．23；P〈0．01）。蛋白印跡法檢測(cè)表明轉(zhuǎn)染siRNA-1后24h，與空白對(duì)照組相比，CD44的蛋白表達(dá)明顯減弱（0．231±0．064與0．675±0．113，q=13．09，P〈0．01）。流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果表明3mmol／L硝普鈉可以成功誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞發(fā)生早期凋亡[（70±6）％]；50、100、200μg／mlCMCS對(duì)硝普鈉誘導(dǎo)的凋亡有-定的抑制作用[凋亡率分別為（51±7）％，（30±4）％，（15±4）％；q=5．08，6．97，9．73；P〈0．01]；但CMCS對(duì)硝普鈉誘導(dǎo)的CD44-siRNA-1轉(zhuǎn)染的軟骨細(xì)胞的凋亡抑制作用比未轉(zhuǎn)染組明顯減弱[凋亡率分別為（34±6）％和（15±4）％，q=6．95，P〈0．01]。結(jié)論CD44特異性siRNA-1轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的大鼠軟骨細(xì)胞能顯著下調(diào)CD44基因的表達(dá)；CD44基因在CMCS保護(hù)硝普鈉誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要的作用。