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人IFN-λ1的克隆表達及其在不同種屬細胞中的抗病毒活性分析

摘要:目的測定IFN-λ1在CaCo2、Vero、BHK-21、MDCK等4種不同種屬來源細胞中的抗病毒活性。方法利用RT-PCR技術從人結直腸腺癌細胞(CaCo2)中擴增獲得人IFN-λ1 (HuIFN-λ1)基因,然后克隆至真核表達載體pCDNA3.1-Flag-HA中,通過質粒轉化、陽性菌落篩選、質粒提取及測序,獲得重組質粒pCDNA3.1-HuIFN-λ1;利用脂質體將其轉染293細胞,48 h后通過Western blot檢測HuIFN-λ1瞬時表達情況,取轉染后上清分別作用于CaCo2、Vero、BHK-21、MDCK等四種不同種屬來源細胞進行HuIFN-λ1抗病毒活性分析。結果從人結直腸腺癌細胞中擴增獲得HuIFN-λ1基因,大小為600 bp,并在293細胞內成功表達HuIFN-λ1,表達產物能抑制VSVG在CaCo2、Vero、BHK-21、MDCK中的增殖,流式細胞儀檢測經HuIFN-λ1處理的上述細胞熒光率分別為73.69%、80.12%、71.73%、69.47%。結論重組表達的人IFN-λ1蛋白對4種不同種屬來源的細胞均存在一定的抗病毒活性,為研究人IFN-λ1在宿主抗病毒免疫和黏膜免疫中的作用機制及其應用奠定了基礎。

關鍵詞:
  • 人結直腸腺癌細胞  
  • 抗病毒活性  
作者:
陳競; 許汪; 宋利娜; 郝鵬飛; 姜宇航; 付婷婷; 金鑫; 金寧一; 李昌
單位:
延邊大學農學院; 吉林延吉133000; 軍事醫(yī)學研究院軍事獸醫(yī)研究所
刊名:
中國病原生物學

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期刊名稱:中國病原生物學

中國病原生物學雜志緊跟學術前沿,緊貼讀者,國內刊號為:11-5457/R。堅持指導性與實用性相結合的原則,創(chuàng)辦于1988年,雜志在全國同類期刊中發(fā)行數量名列前茅。