摘要:目的探討腫瘤壞死因子相關(guān)受體因子6(Traf6)對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖的影響及其可能的作用機(jī)制。方法采用pGPU6/Neo載體構(gòu)建穩(wěn)定敲除Traf6的MCF-7細(xì)胞株,應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR和免疫印跡驗(yàn)證Traf6基因和蛋白的均低表達(dá),采用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8(CCK8)法檢測(cè)MCF-7細(xì)胞增殖情況,流式細(xì)胞儀檢測(cè)MCF-7細(xì)胞周期的變化,蛋白印記法(Western Blot)檢測(cè)MCF-7細(xì)胞中周期蛋白A(Cyclin A)、周期蛋白B(Cyclin B)、周期蛋白依賴激酶(CDK/p34)表達(dá)量和轉(zhuǎn)錄生長(zhǎng)因子β-活化激酶1(TAK1)磷酸化水平。結(jié)果使用pGPU6/Neo載體能夠穩(wěn)定的敲除MCF-7細(xì)胞中Traf6的表達(dá),敲除Traf6能夠抑制MCF-7細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡,將細(xì)胞阻滯在G1期,同時(shí)抑制細(xì)胞周期蛋白Cyclin A、Cyclin B及CDK/p34的表達(dá)及TAK1磷酸化。結(jié)論Traf6表達(dá)的降低能抑制TAK1信號(hào)通路活性,進(jìn)而抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖能力。
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