摘要:目的: 構建pcDNA3.1-β-Trcp真核表達質粒及鑒定,檢測上調β-Trcp對胃癌細胞AGS的β-catenin表達量和亞細胞定位的影響。方法: 應用PCR方法釣取β-Trcp片段與pcDNA3.1載體連接,鑒定重組質粒pcDNA3.1-β-Trcp。在胃癌細胞AGS中分別轉染pcDNA3.1和pcDNA3.1-β-Trcp,利用Real-time PCR和Western blot方法檢測β-Trcp表達情況,免疫熒光檢測胃癌細胞ACS中,β-catenin表達量和亞細胞定位的變化。結果: pcDNA3.1-β-Trcp重組質粒構建成功,并在胃癌細胞AGS中成功表達。轉染pcDNA3.1-β-Trcp質粒的胃癌細胞AGS中β-catenin整體表達量下調,在細胞核內的表達量下調尤為明顯。結論: pcDNA3.1-β-Trcp質粒為進一步研究β-Trcp在胃癌中的作用提供實驗基礎。β-Trcp抑制胃癌細胞AGS的β-catenin表達,核內抑制尤為明顯。
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