摘要：傳統(tǒng)上從雞胚中分離病毒用于疫苗的生產(chǎn)常常不能滿足需求,研究從體外培養(yǎng)的細(xì)胞中分離病毒的途徑成為當(dāng)前疫苗生產(chǎn)領(lǐng)域的迫切需要。本研究利用體細(xì)胞誘導(dǎo)重編程技術(shù)建立永生化細(xì)胞系,為應(yīng)用于疫苗制備等研究和生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。通過慢病毒載體轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子(NANOG, LIN28和C-MYC)重編程雞成纖維細(xì)胞,并穩(wěn)定培養(yǎng)至100代,獲得永生化的細(xì)胞,而后逐步去除細(xì)胞因子、血清等添加物,優(yōu)化細(xì)胞系培養(yǎng)體系,并對細(xì)胞馴化實(shí)現(xiàn)懸浮生長,以獲得單位體積最大密度的細(xì)胞。研究結(jié)果表明:通過轉(zhuǎn)基因?qū)ANOG,LIN28和C-MYC 3個(gè)因子整合入細(xì)胞中表達(dá),細(xì)胞系對堿性磷酸酶染色呈陽性反應(yīng),端粒逆轉(zhuǎn)錄酶(cTERT)基因在細(xì)胞系中顯著上調(diào),并穩(wěn)定培養(yǎng)至100代,使得這些細(xì)胞具有自我更新特性和永生化的潛能。確定了培養(yǎng)基中的血清替代物KSR濃度為20%,并撤除了培養(yǎng)基中bFGF等生長因子,為細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)應(yīng)用提供了可能。永生細(xì)胞實(shí)現(xiàn)懸浮生長,細(xì)胞生長倍增時(shí)間為21.71 h,最大密度為1.3×106 cells/m L。因此,我們通過重編程技術(shù)建立了一株穩(wěn)定的永生化細(xì)胞系,并且使它能在低濃度KSR中懸浮培養(yǎng),這為疫苗制備等研究和生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)。