摘要：目的研究多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌噬菌體Abp1毒力蛋白穿孔素holin(holinAbp1)的生物學(xué)特性及其對(duì)細(xì)菌的毒性作用,并通過(guò)無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)對(duì)毒力蛋白穿孔素融合蛋白進(jìn)行表達(dá)。方法利用生物信息學(xué)技術(shù)分析holinAbp1的蛋白結(jié)構(gòu)特點(diǎn),利用PCR技術(shù)從噬菌體Abp1基因組擴(kuò)增holinAbp1基因,構(gòu)建表達(dá)載體pET23bholinAbp1-gfp并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)中以及無(wú)細(xì)胞蛋白體系中表達(dá),利用Western印跡鑒定蛋白表達(dá)情況。結(jié)果噬菌體Abp1的holin蛋白屬于穩(wěn)定疏水性蛋白,含有3個(gè)跨膜區(qū)域,屬于Phage-holin-3-1家族,成功克隆了holinAbp1-gfp基因,holinAbp1-gfp蛋白在大腸桿菌內(nèi)無(wú)法正確表達(dá),對(duì)大腸桿菌表達(dá)宿主具有明顯抑制作用,而在無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了蛋白表達(dá)。結(jié)論通過(guò)無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了holinAbp1-gfp融合蛋白表達(dá),將為毒力蛋白的表達(dá)和噬菌體治療藥物的研發(fā)提供應(yīng)用基礎(chǔ)和技術(shù)支持。