摘要：本研究對具有大分子水解能力的環(huán)糊精水解酶cds1-3的蛋白結(jié)構(gòu)進行分析,選取底物通道相關氨基酸進行定點突變。通過比較突變酶和野生酶的功能差異,定位決定cds1-3特殊功能的氨基酸。采用sybyl 1.2進行蛋白質(zhì)底物結(jié)合分析,選取和多聚體形成、底物結(jié)合以及底物通道相關的氨基酸Glu66、Pro48、Phe289為突變位點,反向PCR構(gòu)建pSE380/E66G、pSE380/P48H、pSE380/F289A表達質(zhì)粒并進行表達,獲得酶活突變體并與原始酶進行底物特異性比較分析。其結(jié)果顯示,突變酶E66G降解大分子底物木薯淀粉和支鏈淀粉的相對酶活力分別提高26.96%和23.15%,而對小分子底物普魯蘭糖的水解能力下降13.14%。因此,cds1-3是一個能水解大分子底物的特殊環(huán)糊精水解酶,氨基酸Glu66是cds1-3水解大分子支鏈淀粉的關鍵氨基酸之一。